目的:对中药白芍的主要活性成分芍药苷及其多糖组分进行优选的提取、分离和纯化,进一步精制芍药苷及其多糖组分,制备不同的白芍提取物滴眼液,通过皮下注射氢溴酸东莨菪碱结合干燥环境,制备实验性干眼小鼠模型,探讨白芍中提取的多种组分滴眼液对干眼症的作用及其机制。方法:采用醇提水沉法以粗提取芍药苷,药渣烘干后以水提白芍多糖。壳聚糖凝絮实验除脱蛋白,静态吸附法优选出合适的大孔树脂或阳离子交换树脂作分离纯化,最后采用硅胶柱法精制高纯度芍药苷,采用纤维素DE 52凝胶柱精制分离多糖组分,并且命名水洗脱部分为BS-P1,0.05 mol·L-1洗氯化钠洗脱为BS-P2,脱盐冻干。各提取物分别常规制备滴眼液。皮下注射氢溴酸东莨菪碱联合低湿环境制作小鼠干眼模型,造模成功后随机分为模型组、空白溶剂组、阳性药物组、芍药苷组、白芍多糖-1(BS-P1)组、白芍多糖-2(BS-P2)组,给予对应药物滴眼治疗10天,其中阳性药物组用1%玻璃酸钠滴眼液,空白溶剂组使用空白滴眼液,另取未造模处理的正常小鼠作正常组,不予治疗。治疗期结束后以泪液分泌量、荧光素钠染色及角膜不平整度检测作症状学指标;取角膜、结膜、眼周腺体作HE染色,阿利新蓝-过碘酸雪夫氏染色计数结膜杯状细胞,结膜穹隆部作扫描电镜共作形态学观察;Westem Blot检测眼表肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素IL-1β、黏蛋白MUC1的蛋白表达水平,探索各滴眼液对实验性干眼小鼠的作用。结果:对白芍总苷水提液,优选使用D101、聚酰胺树脂分离纯化,得到纯度为67.04%的芍药苷粗品,得率为2.62%。经硅胶柱洗脱,进一步纯化得到纯度为94.53%的芍药苷。按0.1g生药·mL-1提取原液体积的3%添加壳聚糖母液,白芍水提液的除蛋白效果最好,达64.90%±0.33%,优选出使用Na+型732阳离子交换树脂,蛋白清除率可高达85.67%,糖保留率为94.96%,得粗多糖2.6 g,得率为1.3%。粗多糖经DE 52纤维素柱子,分步洗脱,脱盐冻干,分别得到BS-P1(白色)、BS-P2(纯白色)、BS-P3(淡黄色)、BS-P4、BS-5 5个组分,高效凝胶色谱法检测BS-P1与BS-P2得重均分子量分别为 19712 及 178291732。动物实验,与正常组相比,模型组泪液分泌量明显减少,角膜荧光素染色及不规则度评分升高,差异均有统计学意义(P<0.05);形态学表明其角膜上皮排列凌乱,层数减少,表层半脱落细胞多见,结膜杯状细胞数量减少,扫描电镜示结膜穹窿部杯状细胞明显萎缩,部分局部可见大量异常粘稠的分泌物覆盖杯状细胞。和模型组比较,各药物组中仅BS-P1能显著的提高泪液量(P<0.05),余各组尚不能表明可以明显提高泪液量;相反地,除BS-P1组外,各药物组均能同时显著提高角膜平整度及降低角膜染色评分(P<0.05),表明玻璃酸钠、芍药苷、BS-P2对角膜具有一定地保护作用;形态学检测发现各药物组均对干眼的病理学改变有一定的改善作用,Western Blot发现各药物均能显著纠正IL-1β、MUC1的异常表达,而对TNF-α的异常高表达,则仅阳性药与芍药苷效果显著,多糖组份BS-P1与BS-P2有一定的纠正效果,但差异没有统计学意义。结论:微波提取白芍饮片,相继使用高浓度乙醇与水作提取溶剂,分别提取芍药苷与白芍多糖,大大提高其利用率,可降低生产成本,促进资源再利用。使用D101大孔树脂结合硅胶柱柱层析,可以得到高纯度的芍药苷。使用Na+型732阳离子交换树脂对白芍多糖进行纯化,能有较高蛋白质清除率与多糖保留率。经DE 52柱子可以分离纯化纯化白芍多糖,得到BS-P1与BS-P2两个主要的较匀一成份,前者为中性多糖,后者属酸性多糖。白芍提取物中芍药苷与多糖组分BS-P2均显示出较好的治疗实验性干眼小鼠的角膜损伤作用,很可能是主要通过抑制炎症途径来起作用的。而白芍多糖组分BS-P1则在增加泪液量上有较好的作用,有一定抗炎、维护眼表的作用。提示白芍中多种成份是通过不同途径参与、发挥干眼治疗的“养阴”作用。