论文部分内容阅读
目的检测胃腺癌SGC7901细胞对抗肿瘤药物多柔比星（ADM）和依托泊苷（VP-16）的敏感性，再联合2-氨基4-(S-丁基磺酰亚氨)丁酸（BSO）和乙酰半胱氨酸（NAC）在改变细胞内还原型谷胱甘肽（GSH）的含量前提下进一步检测胃腺癌SGC7901细胞对ADM和VP-16的敏感性，分析前后敏感性变化的机制，为临床胃癌的化疗增敏剂药物研究提供有价值的理论基础。方法（1）利用噻唑蓝比色法（MTT法）作BSO无毒浓度的测定，同法测定胃腺癌SGC7901细胞对抗肿瘤药物ADM和VP-16的半数抑制浓度（IC50）值,作为对照组。活性氧（ROS）检测试剂盒检测胃腺癌SGC7901细胞在BSO的无毒浓度和实验常选用5mmol/L NAC预处理情况下测定细胞内ROS水平,并在20%IC50ADM和20%IC50VP-16浓度的预处理下测定细胞内ROS水平，均作为对照组。（2）利用MTT法测定胃腺癌SGC7901细胞在BSO联合ADM和BSO联合VP-16预处理下的IC50值，同法测定在NAC联合ADM和NAC联合VP-16预处理的IC50值，并与(1)中对照组进行差异统计学分析。ROS检测胃腺癌SGC7901细胞在BSO联合20%IC50ADM和BSO联合20%IC50VP-16预处理下细胞内ROS水平，同法检测NAC联合20%IC50ADM和NAC联合20%IC50VP-16预处理下细胞内ROS水平，并与（1）中对照组进行差异统计学分析。（3）胃腺癌SGC7901细胞在未作BSO和NAC预处理下通过GSH和GSGG试剂盒检测细胞内GSH的含量，作为对照组，进一步检测BSO在无毒浓度预处理条件下和5mmol/L NAC预处理后细胞内GSH的含量，与对照组进行差异统计学分析。（4）胃腺癌SGC7901细胞在未作BSO和NAC预处理下通过γ-谷氨酸-半胱氨酸合成酶（γ-GCS）试剂盒检测细胞内γ-GCS活力，并作为对照组，进一步检测BSO无毒浓度预处理条件下和5mmol/L NAC预处理细胞内γ-GCS的活力，与对照组进行差异统计学分析。（5）胃腺癌SGC7901细胞未作BSO和NAC预处理情况下通过细胞免疫组化观测细胞膜上MRP1和P-GP表达量，并作为对照组，同法在BSO无毒浓度预处理条件下和5mmol/L NAC预处理后观测细胞膜上MRP1和P-GP表达量，与对照组进行差异统计学分析。结果(1) BSO对胃腺癌SGC7901的IC50值为3.5mg/ml,无毒浓度检测为0.7mg/ml，ADM和VP-16对胃腺癌SGC7901细胞的IC50值分别是3.4ug/ml和17μg/ml。胃腺癌SGC7901细胞在未作任何处理条件下测定的ROS水平为2.73。胃腺癌SGC7901细胞在BSO无毒浓度下预处理测定细胞内ROS水平为5.82，5mmol/LNAC预处理细胞内ROS水平为0.97，在20%IC50ADM和20%IC50VP-16浓度的预处理下细胞内ROS水平分别为5.12和4.29.（2）胃腺癌SGC7901细胞经BSO预处理的ADM和VP-16的IC50值分别为1.12ug/ml和4.74ug/ml，与（1）中对照组比较，差异显著，具有统计学意义（p<0.01），同法NAC预处理的ADM和VP-16的IC50值分别为4.42ug/ml和21.23ug/ml，与（1）中对照组比较，差异显著，具有统计学意义（p<0.01）。无毒浓度的BSO预处理20%IC50ADM和20%IC50VP-16细胞内ROS水平分别为6.30和6.08，与（1）中对照组比较，差异显著，具有统计学意义（p<0.01）。5mmol/L NAC预处理20%IC50ADM和20%IC50VP-16细胞内的ROS水平分别为2.09和3.00，与（1）中对照组比较，差异显著，具有统计学意义（p<0.01）。（3）胃腺癌SGC7901细胞在未作BSO和NAC预处理下检测细胞内GSH的水平为2.31umol/g protein，进一步在BSO无毒浓度预处理条件下和5mmol/L NAC预处理检测细胞内GSH的水平分别是0.18umol/gprotein和12.67umol/g protein，与对照组相比，差异显著，具有统计学意义（p<0.01）。（4）胃腺癌SGC7901细胞在未作BSO和NAC预处理下检测细胞内γ-GCS活力的水平为10.80umol/g protein，进一步检测BSO无毒浓度预处理条件下细胞内γ-GCS的活力的水平为7.62umol/g protein，与对照组比较有明显统计学意义（p<0.05），然而5mmol/L NAC预处理检测细胞内γ-GCS活力的水平为11.43umol/g protein，与对照组比较无统计学意义(p﹥0.05)。（5）5mmol/L NAC单独处理SGC7901细胞后，细胞膜上的MRP1和P-GP与对照组比较无明显差异（p﹥0.05），通过无毒浓度的BSO处理后，细胞膜上的MRP1和P-gp与对照组比较也无明显差异（p﹥0.05）。结论(1) BSO是γ-GCS活性的特异性抑制剂，NAC对γ-GCS的活性无明显影响。（2）BSO对细胞内GSH水平有明显的抑制作用，联合ADM和VP-16能对胃腺癌SGC7901细胞内ROS的水平有进一步的提高作用，作为化疗药物的增敏剂有明显的增敏作用。（3）NAC对细胞内的GSH有明显的促进作用，联合ADM和VP-16能对胃腺癌SGC7901细胞内ROS水平有明显的抑制作用，降低了化疗药物对肿瘤细胞的敏感性，为BSO是引起GSH的下降引起的化疗敏感性的增强起到很好的佐证。（4）胃腺癌SGC7901细胞膜上的MRP1和P-GP在5mmol/L NAC和无毒浓度BSO的作用下未发生明显的表达变化，说明BSO和NAC通过改变GSH来改变肿瘤细胞化疗敏感性的途径，可能不会增加肿瘤细胞的耐药蛋白的表达，从而为解决肿瘤耐药提供新的思路。