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目的:建立分离纯化细脚拟青霉多糖的技术方法,获取均一的多糖组分,对其进行理化性质检测和免疫学活性筛选.方法:(1)采用水提醇沉淀法提取细脚拟青霉多糖(PtPS)成分;阴离子交换层析(DEAE-cellulose)和凝胶(Sephadex G)过滤层析反复色谱纯化,获得均一组分.(2)在紫外区(200~400nm)扫描判断细脚拟青霉总多糖(PtPS)的纯度;通过减少加样量和调整试剂比例改良测定糖含量的方法,并进行方法学评价;用改良后的苯酚-硫酸法测定样品中的糖含量.(3)高效液相色谱(HPLC)法鉴定细脚拟青霉多糖PtPS1、PtPS2的纯度,并根据线性回归方程计算分子量;薄层层析(TLC)和气相色谱(GC)法分析单糖组成并计算摩尔比;自动元素分析仪分析N、C、H元素含量.(4)体外培养人外周血单个核细胞(PBMC),以脂多糖(LPS)为阳性对照,用不同浓度的PtPS单独或协同LPS刺激培养PBMC,用ELISA法测定TNF-α的水平;以LPS、植物血凝素(PHA)为阳性对照,用不同浓度的PtPS刺激培养PBMC,用MTT比色法测定增殖活性.结论:(1)本研究建立了细脚拟青霉多糖的分离纯化方法,能够从细脚拟青霉菌丝体中有效地获取满足实验要求的均一多糖组分.苯酚-硫酸光度法经改良后,操作简便、可靠,样品显色稳定,重现性好,而且减少了样品的用量,提高了得率,更加实用.(2)细脚拟青霉多糖PtPS1、PtPS2是不含蛋白质的杂多糖分子,分子量分别为1.9×10<4>、1.2×10<6>,糖组成:PtPS1:Man-Glc-Gal4:1:9,PtPS2:Man-Glc-Gal 1:1:9(摩尔比).(3)细脚拟青霉总多糖PtPS对体外培养的PBMC具有激活作用,提示该菌丝体中的多糖成分是其发挥免疫调节作用的主要活性物质.