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本研究以小鼠视网膜神经节细胞(Retinal ganglion cells, RGCs)为研究对象,观察转化生长因子β(Transforming growth factorβ, TGFβ)信号传导通路在小鼠RGCs轴突再生过程中的作用。本实验应用木瓜蛋白酶消化法、免疫磁珠筛选等方法成功分离获得小鼠RGCs, Brn3b免疫细胞荧光化学染色对其进行鉴定,应用Calcein AM及Hoechst对细胞进行免疫细胞荧光化学染色,从而在12个蛋白激酶抑制剂中成功筛选出促小鼠RGCs存活及其神经突再生的4个候选激酶抑制剂即TGFβ?型受体激酶抑制剂(TGFβReceptor Inhibibitor, TGFβRI)(AL 47070)、P38MAP激酶抑制剂(AL 42243、AL 42245、AL 46144),其中作用最明显的为TGFβ?型受体的抑制剂(AL 47070);应用Realtime PCR检测TGFβ下游靶基因IGF1、NRP2、IL6,发现AL 47070作用组与对照组相比较IGF1、NRP2、IL6表达明显下降,说明AL 47070从mRNA水平阻断了TGFβ信号传导通路;应用Western-blot方法检测TGFβRI(AL 47070)作用小鼠RGCs后,总Smad2、P-smad2、总Smad3、P-smad3的表达,发现总Smad2、Smad3并未有明显变化,而P-smad2、P-smad3明显下降,说明从蛋白水平证明TGFβRI(AL 47070)阻断了小鼠RGCs的TGFβ信号传导;应用MAP2b和Tau免疫细胞荧光化学染色,发现TGFβR(IAL 47070)作用小鼠RGCs后即有MAP2b和Tau双阳性的神经突还有MAP2b染色阳性而Tau染色阴性的神经突,证明在体外细胞培养模式下,阻断TGFβ信号传导通路可以促进小鼠RGCs树突及其轴突再生;应用Calcein AM及Hoechst免疫细胞荧光化学染色成功的证明在细胞培养条件及视网膜组织块培养条件下,TGFβRI(AL 47070)比已知的对轴突再生有促进作用的神经营养因子如BDNF、CNTF、GDNF强;此外,建立小鼠视神经夹伤模型,应用甲苯胺蓝尼氏小体染色发现手术组比未手术组细胞明显减少,证明我们模型建立成功,应用GAP-43免疫组织荧光化学对视神经进行染色,证明在视神经损伤的情况下,阻断TGFβ信号传导可以促进小鼠RGCs轴突再生。综上所述,本实验成功的分离培养小鼠RGCs,分别在体外、体内实验发现阻断TGFβ信号传导能路可以促进小鼠RGCs的轴突再生。为治疗青光眼等视网膜神经节细胞损伤疾病提供了新的实验基础,期望能为治疗青光眼等疾病提供新思路及手段。