【摘 要】
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目的:对我们课题组已经成功制备的万古霉素交联脱细胞骨块进行性状分析方法:首先根据我们课题组的实验方法制备万古霉素交联的脱细胞骨块。然后进行如下实验:1、通过抑菌圈试验和万古霉素释放试验检测交联的脱细胞骨上万古霉素的释放量。2、扫描电镜观察骨细胞外基质的微观结构组成,EDS能谱分析其化学元素组成。3、经洗脱的Van-b ECM骨块进行抗金黄色葡萄球菌粘附实验,4、采用CCK8实验对Van-b ECM
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目的:对我们课题组已经成功制备的万古霉素交联脱细胞骨块进行性状分析方法:首先根据我们课题组的实验方法制备万古霉素交联的脱细胞骨块。然后进行如下实验:1、通过抑菌圈试验和万古霉素释放试验检测交联的脱细胞骨上万古霉素的释放量。2、扫描电镜观察骨细胞外基质的微观结构组成,EDS能谱分析其化学元素组成。3、经洗脱的Van-b ECM骨块进行抗金黄色葡萄球菌粘附实验,4、采用CCK8实验对Van-b ECM骨块提取的浸提液法测试其细胞毒性,5、live/dead染色检测成骨细胞与Van-b ECM骨块的相容性。结果:本研究通过上述实验方法对万古霉素修饰的脱细胞骨块进行验证分析,我们发现:（1）脱细胞骨块由于具有多孔结构,在进行化学交联的过程中容易吸附大量的万古霉素从而产生细胞毒性,不利于成骨细胞生长。（2）我们通过PBS缓冲液对交联后的骨块进行清洗,抑菌圈试验和万古霉素释放试验表明其在4h后能去除吸附的万古霉素,最终得到单纯交联万古霉素的细胞外基质骨块（Van-b ECM）。（3）EDS能谱结果表明经洗脱后的Van-b ECM骨块仍然负载万古霉素,表明交联万古霉素的脱细胞骨难以洗脱。（4）对洗脱后的Van-b ECM骨块进行抗金黄色葡萄球菌黏附实验表明交联的Van-b ECM具有抗金葡菌黏附能力,是一种有效的抗菌材料。（5）万古霉素浓度一旦超过1mg/ml时对成骨细胞活性产生抑制作用;通过live/dead染色显示成骨细胞能够在Van-b ECM上存活。进一步对洗脱的Van-b ECM骨块采用CCK-8法验证其细胞毒性,结果表明Van-b ECM具有较低的细胞毒性。结论:单纯万古霉素交联的脱细胞骨块对成骨细胞具有低毒性和良好的生物相容性,具有抗金黄色葡萄球菌的作用,是一种非常有前景的抗菌材料。
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