I型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus-1,HSV-1)是广泛传播于人类的一种常见病毒,可引起皮肤、粘膜和神经系统内的疱疹。近年来的研究表明HSV-1与阿尔兹海默症(Alzheimer disease,AD)、帕金森(Parkinson’s disease,PD)等疾病的致病过程也密切相关。此外,HSV-1引起的脑炎如果不及时治疗死亡率高达70%以上。HSV-1主要潜伏在三叉神经节,一旦感受外界压力或者宿主自身免疫力下降时就会以疱疹的形式出现。由于该病毒具有很强的逃避免疫系统的能力且致病能力较弱,因此用于预防HSV-1的疫苗还未开发成功。HSV-1病毒在细胞内的复制与成熟要依赖宿主细胞因子的帮助才能完成。然而与HSV-1诱导的细胞死亡有关的宿主因子尚未被完全鉴定,因此鉴定出新的宿主依赖因子显得尤为重要。自2012年以来,CRISPR/Cas9系统由于操作简单迅速成为基因编辑的热门工具,利用CRISPR/Cas9系统进行基因的敲除、敲入、基因修复,基因激活与抑制等得到了广泛应用。本研究中,我们选取实验室前期运用CRISPR/Cas9文库筛选出来的抗HSV-1的宿主基因肌醇六磷酸激酶2(Inositol hexaphosphorokinase,IP6K2)为研究对象并进一步探究作用机制。IP6K2可以生成焦磷酸肌醇、二磷酸肌醇磷酸,选择性地影响细胞死亡和细胞凋亡,并且参与了多种生物反应进程。IP6K2的过度表达使细胞对DNA损伤、缺氧、过氧化氢和干扰素等多种凋亡刺激敏感增加。此外,研究表明IP6K2参与p53-p21细胞凋亡通路。IP6K2通过与p53直接结合起到调节p53和下游相关因子的作用,降低细胞周期素依赖性激酶抑制p21等前阻滞基因的表达,而有利于细胞周期阻滞,从而介导p53引起的细胞凋亡。我们利用CRISPR/Cas9技术构建多种敲除细胞株,并对IP6K2基因做了深入研究。我们的研究表明,HSV-1感染后,IP6K2缺失的细胞明显比野生型细胞死亡更慢,揭示了IP6K2参与了HSV-1诱导的哺乳动物细胞死亡的调控。同时,我们证明了IP6K2缺失引起的病毒抵抗并不依赖于细胞膜的阻断,而是显著降低了病毒在细胞内的数量。此外,我们还发现在BGC-823细胞中,IP6K2缺失引起的病毒抵抗并不依赖于干扰素通路。最后通过检测IP6K2在p53-p21凋亡通路方面的影响,我们发现IP6K2可以通过调控p53-p21凋亡通路及下游基因来起到抗HSV-1的作用。我们的结果表明IP6K2抵抗HSV-1引起的细胞死亡这一机制,可能代表了其他疱疹病毒的一种广泛的模式。此外,IP6K2有可能作为抗HSV-1感染的潜在靶点用于未来的新药开发。