核质蛋白(nucleoplasmin)是高等真核生物卵母细胞和卵细胞核中重要的分子伴侣，体外实验证明核质蛋白在核小体的装配、精子染色质重建以及细胞凋亡的染色质聚缩过程中具有重要的调节作用。在对家蚕蛹期cDNA文库测序中，我们获得一条cDNA序列长度为1183 bp，其编码的氨基酸序列与已知的核质蛋白序列共有一个保守的结构域。该保守结构域有约100个氨基酸残基，同源性达61.1﹪。我们将它命名为家蚕类核质蛋白 BmNLP(nucleoplasmin-like protein fromBombyx mori)，Genbank登录号为EF210318。该基因的开放阅读框全长486 bp，编码的蛋白有161个氨基酸残基，预测分子量为18.2 kDa，等电点为4.33。将其ORF克隆到原核表达载体pET-28a中，构建重组质粒，双酶切鉴定及序列测定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)，经IPTG诱导，该基因得以成功表达。表达的重组蛋白以可溶形式存在，经过镍柱亲和层析纯化后，以纯化的重组蛋白为抗原免疫兔获得该蛋白的多克隆抗体，经ELISA检测，抗体效价可达1∶25600以上。ELISA和Western blot检测蚕蛹蛋白，反应都呈阳性，进一步证实了BmNLP的存在。利用该抗体以 Western blot检测家蚕三个发育阶段和五龄幼虫四种组织或器官中BmNLP蛋白的表达和分布，发现在卵、五龄幼虫、蛹三个发育阶段均有表达，表达量比较接近；各个组织或器官中，在头部表达最少，其次是中肠，而丝腺中表达最多。利用抗体的免疫荧光标记对家蚕Bm5细胞定位，观察到荧光集中分布在细胞内一个近似圆形的区域，以DAPI复染后确定为细胞核，从而证实 BmNLP定位在细胞核中；利用激光断层扫描发现间期细胞中BmNLP分布更靠近核膜，而分裂细胞中整个核都有分布。此外，以该基因的ORF为模板体外转录dsRNA，琼脂糖凝胶电泳检测后，脂质体法转染 Bm5细胞，48 h后以MTT法检测干扰前后细胞活力，同时提取细胞总蛋白作ELISA检测，RNA干扰后的细胞活力下降，总蛋白中目的蛋白含量明显低于阴性对照；将细胞用PI染色后流式细胞仪分析，与正常细胞相比，干扰后的细胞在S期出现一个检测峰，表明细胞被阻滞在这一时期。