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目的:
采用羧基化多壁碳纳米管(MWNT-COOH)修饰玻碳电极,建立应用于临床生化检测中的一种新方法,电化学方法。
方法:
将新购置的多壁碳纳米管(MWNT)加热进行硝酸回流约48小时后,用重蒸水进行抽滤,直到将残余的硝酸全部去除干净,然后取适量干燥后的MWNT用傅立叶红外光谱仪进行红外表征,证实有羧基存在。精确称取已羧基化的多壁碳纳米管1毫克,加入N,N二甲基甲酰胺(DMF)10毫升,放入超声波清沈器超声,直到将多壁碳纳米管充分均匀地分散于N,N二甲基甲酰胺(DMF)中,形成0.1mg/mL的MWNT-COOH黑色溶液。
将新购置的裸玻碳电极以金相砂纸、Al2O3粉末(0.05μm)在麂皮上打磨至光亮,并依次在1mol/LNaOH、1mol/LHNO3、丙酮以及二次蒸馏水中超声洗涤。在0.2m01/LpH=7.0的PBS缓冲溶液中从-0.2~+0.6V范围内进行循环扫描至基线平稳。然后在预处理后的玻碳电极表面滴涂2.5μLMWNT溶液,在红外灯下烘至溶剂完全挥发即成羧基化多壁碳纳米管(MWNT-COOH)修饰玻碳电极,放置备用。
结果:
1.对过氧化氢的检测在0.2mo/LpH=7.0的PBS缓冲液中,MWNT-COOH修饰电极经循环伏安扫描,表现出一对氧化还原峰,峰电位和峰电流十分稳定。在100mv/s扫速下,氧化还原峰电位分别为-0.102V和-0.152V。修饰电极的氧化还原峰很宽,背景电流也大,这是由于电极表面电荷增加所致。根据文献可知在MWNT膜中电活性基团为羧基,在电极上得到4个电子被还原为醇基,再氧化后重新变成羧基。
伏安图表明在-0.2~+0.6V电位范围内,H2O2在裸玻碳电极上的电化学氧化电位很大,只出现拖尾现象,而在修饰电极上出现了一明显的氧化峰,氧化峰电位为+0.142V;说明该修饰电极对H2O2具有很好的催化氧化作用,其可能的原因是MWNT-CH2OH在氧化过程中,产生的不稳定中间体参与并催化了H2O2的氧化反应。但对于具体的催化过程我们还在进一步的研究中。
先用KMnO4将30%H2O2标准溶液进行标定,再按实验所选的条件分别对稀释后不同浓度的H2O2溶液进行循环伏安法测定,随着浓度的增大,H2O2在修饰电极上的氧化电流也随着增大。实验结果表明,在1.2×10-6~1.0×10-3mol/L范围内,H2O2的氧化峰电流与其浓度具有良好的线性关系,其线性回归方程为:|ip|=6.028×10-5+0.475c(H2O2),相关系数r=0.9986,检出限为3.1×10-7mol/L。
2.对尿酸的检测在0.6mol/LpH=6.84的PBS缓冲液中,在-0.6-+0.8V电位范围内,100mv/s扫速下电极经循环伏安扫描,形成一伏安图,但没有明显的氧化峰形出现,在缓冲液中加入尿酸样品后再在相同条件下进行循环伏安扫描,出现的伏安图中有一明显的氧化峰形,峰电位为+0.409V,说明电极对尿酸催化有了响应。
实验结果表明,在5.0×10-5-6.5×10-3mmol/L浓度范围内,尿酸的氧化峰电流与其浓度呈良好的线性关系,其线性回归方程为:|ip|=5.046×10-5+0.562c(UA),相关系数r=0.9935,相关系数r=0.9989,最低检测线为1.0×10-6mmol/L。
3.对维生素C的检测结果表明在-0.6~+0.6V电位范围内,VC在裸玻碳电极上的电化学氧化电位很大,只出现拖尾现象,而在修饰电极上出现了一明显的氧化峰,氧化峰电位为+0.345V;说明该修饰电极对VC具有很好的催化氧化作用,其可能的原因是碳纳米管在氧化过程中,产生的不稳定中间体参与并催化了VC的氧化反应。
将VC标准品粉分别配成不同浓度的标准溶液,再按实验所选的条件分别对稀释后不同浓度的VC溶液进行循环伏安法测定,随着浓度的增大,VC在修饰电极上的氧化电流也随着增大。实验结果表明,在5.0×10-6~1.0×10-3mol/L范围内,VC的氧化峰电流与其浓度具有良好的线性关系,其线性回归方程为:|ip|=-0.0898+0.5416c(VC),相关系数r=0.9998,检出限为4.2×10-7mol/L。
结论:
本研究所建立的医用过氧化氢,血清尿酸,尿液中维生素C电化学测定方法,具有灵敏度高,准确性好,快速响应等特点,并且线性范围宽,所需仪器简单,试剂成本低,适合各级医院推广使用。