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背景和目的:难治性急性髓系白血病(AML)包括复发性AML、原发耐药AML、老年AML及继发AML,是目前白血病治疗困难的类型。它们具有对化疗药物不敏感、完全缓解(CR)维持时间短、易复发等共同特点,成为治疗困难的AML类型之一。1995年Yamada等提出以预激为机制的CAG方案,经多个临床试验证明,CAG方案在治疗难治性AML方面具有良好疗效:完全缓解(CR)率达62%～86%;生存期中位数8～17个月;与常规化疗相比,其毒副作用小,仅有轻至中度的骨髓抑制,患者生活质量高。CAG方案的优越性在于(1)G-CSF可以募集肿瘤细胞由GO期进入细胞增殖周期,从而增强化疗的敏感性。但对正常粒细胞、单核细胞并无作用或仅有轻微作用。(2)在G-CSF存在下,AML克隆优先于正常克隆,被长期低剂量Ara-c作用(3)使肿瘤细胞同步化作用于S期,以利于S期特异性药物作用。(4)Acla对多药耐药基因有效,G-CSF可以提升这种作用。并且相比于其他蒽环类药物,其心脏毒性较轻,因此更适合于老年患者。(5)低剂量Acla、Ara-c、G-CSF可降低化疗相关性死亡率,增加患者耐受性。目前,一系列小规模临床试验证实,以CAG方案为代表的预激方案在临床上取得了较好的疗效,CR率在41.7%-70%,OR率在66.7%-84%。但是,应用预激方案时,粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的应用时间与疗效是否相关未见报道;除CAG方案外,其他预激方案的作用机制鲜见报道;对CAG方案的体内作用机制亦不明了。本试验初步从体外及体内试验两方面初步探索上述问题。方法:第一部分:体外试验探讨预激方案中G-CSF的最适加药时间以U937细胞株为研究对象,体外环境下,在化疗药物作用前不同时间加入G-CSF,分别进行细胞形态观察、检测不同时间加药组的细胞抑制率、流式细胞仪检测细胞凋亡率和S期细胞比例。第二部分:不同预激方案(CAG、HAG、DAG)体外作用于U937细胞的机制探讨以U937细胞株为研究对象,体外环境下分别以CAG、HAG、DAG方案加药,分别进行细胞形态观察、检测不同时间加药组的细胞抑制率、流式细胞仪检测细胞凋亡率和S期细胞比例。第三部分:体内试验初步探讨CAG方案的促凋亡作用与同步化现象以我院2例难治性急性髓细胞白血病患者为研究对象,分别以CAG方案化疗,于治疗d0、d15、d28抽提骨髓单个核细胞进行细胞形态学观察、流式细胞仪检测凋亡情况、S期细胞比例等。结果:第一部分:各组CAG方案治疗后48小时,凋亡细胞均增多。在联合用药48小时后,各用药组抑瘤率基本相仿,均高于对照组;联合用药48小时后细胞抑制率高于联合用药24小时后。S期细胞比例与细胞凋亡率呈正相关。第二部分:联合用药48小时后,CAG组、DAG组、HAG组细胞抑制率基本相仿,CAG组、HAG组细胞凋亡比例及S期细胞比例较DAG组升高。各组联合用药48小时后,细胞抑制率、凋亡率均较用药24小时后升高。第三部分:两例M5患者应用CAG方案后均取得完全缓解,骨髓涂片可见凋亡细胞,骨髓单个核细胞流式细胞仪检测可见大量凋亡细胞。结论:体外试验中G-CSF与化疗药物同时应用证实有效。体外试验证实预激方案对U937细胞株有确切抑制作用,CAG、HAG方案以诱导细胞凋亡为主、DAG方案促使细胞坏死,轻度诱导凋亡。体内试验证实,诱导肿瘤细胞凋亡是CAG方案的可能作用机制之一,与细胞周期的相关性有待进一步积累病例研究。