特定mRNA的输出、转录和翻译是基因表达的必要前提。然而，这些连续步骤之间的功能联系尚不清楚。在酵母及人细胞中，mRNA输出因子Gle1对mRNA从细胞核到细胞质的输出是必需的，有研究显示Gle1参与酿酒酵母的蛋白质翻译起始和翻译终止，并且在翻译终止中Gle1可以直接与肽链释放因子相互作用。　　 在真核生物中，两类肽链释放因子参与蛋白质的翻译终止，分别是第一类肽链释放因子eRF1和第二类肽链释放因子eRF3。人类细胞中存在两种eRF3，分别为heRF3a、heRF3b，二者只有N末端结构域不同。　　 为了了解Gle1是否也参与了人的蛋白质翻译终止，本研究利用酵母双杂交以及免疫共沉淀证实了人Gle1蛋白与参与蛋白质合成终止的两类肽链释放因子之间的相互作用，并初步确定了hGle1与肽链释放因子相互作用的区域。同时通过免疫共定位分析了在HeLa细胞中hGle1蛋白与两类肽链释放因子的亚细胞共定位。此外，本研究检测了hGle1的过表达对蛋白质合成、蛋白质翻译终止以及细胞增殖的影响。研究的主要结果如下:　　 利用本实验室已构建的重组质粒pBluescript-hGle1和已克隆的人类heRF1、heRF3a以及heRF3b构建了一系列酵母双杂交重组质粒，并将这些重组质粒分别共转化至酵母菌株AH109，同时设定实验对照组，经四缺培养基SD-Leu-Trp-His-Ade严格筛选，β-半乳糖苷酶活性分析结果表明，表达hGle1/heRF1，hGle1/heRF3a或者hGle1/heRF3b的酵母菌均显示蓝色，与阳性对照组(表达heRF1/heRF3a)的结果一致，而阴性对照组（只表达hGle1，heRF1，heRF3a或heRF3b）则未显示蓝色。表明hGle1与人两类肽链释放因子heRF1，heRF3a，heRF3b均相互作用。　　 为了进一步验证hGle1与肽链释放因子之间的相互作用，构建了真核重组表达质粒pCMV-Myc-heRF1、pCMV-Tag2B-hGle1。采用免疫共沉淀的方法，在HeLa细胞中分别共转染hGle1和两类肽链释放因子的真核表达质粒，并设定对照组。实验结果表明，Flag-hGle1可以免疫共沉淀Myc-heRF1、GFP-heRF3a以及GFP-heRF3b，而在阴性对照的细胞中无法检测出这种相互作用，证实在人细胞中hGle1与两类肽链释放因子之间的相互作用确实存在。　　 为了了解hGle1和两类肽链释放因子在细胞内的分布，构建了重组表达载体pEGFP-N1-heRF1，将质粒pCMV-Tag2B-hGle1和pEGFP-N1-heRF1、pEGFP-N1-heRF3a或pEGFP-N1-heRF3b共转染HeLa细胞。用hGle1的特异性抗体免疫染色，激光共聚焦显微镜观察发现，融合有绿色荧光蛋白的heRF1、heRF3a和heRF3b大都分布在细胞质，而红色荧光信号所显示的hGle1尽管在核周有大量积累，但在细胞质中仍有分布，提示其在细胞质内可能具有一定的功能。而hGle1与肽链释放因子在细胞质中的共定位也进一步提示hGle1很可能在调节蛋白质翻译终止的过程中起作用。　　 为了探讨hGle1在蛋白质合成过程中的作用，在HeLa细胞中共转入0.3μg海肾荧光素酶报告基因质粒pRL-TK和0.1μg-0.6μgpCMV-Tag2B-hGle1或pCMV-Tag2B-GST质粒，转染48h后裂解细胞测定海肾荧光素酶的活性。结果表明，与共转入pCMV-Tag2B-GST相比，共转入pCMV-Tag2B-hGle1后细胞内的海肾荧光素酶活性明显升高，并呈现剂量依赖关系，提示在HeLa细胞中hGle1的过表达对细胞内蛋白质的合成有促进作用。进一步采用双荧光素酶报告系统检测hGle1过表达对蛋白质翻译终止的影响，结果显示，共转入pCMV-Tag2B-hGle1后，HeLa细胞内双荧光素酶通读率明显降低，也呈现剂量依赖关系，说明hGle1的过表达促进细胞内蛋白质的翻译终止。　　 利用MTT法检测hGle1的过表达对HeLa细胞增殖率的影响，结果显示，与对照组相比，转入pCMV-Tag2B-hGle1的细胞增殖速率较高，这表明hGle1的过表达对细胞的增殖有一定的促进作用。　　 本研究还初步确定了hGle1和两类肽链释放因子相互作用的结构域。对hGle1进行了截短突变，并构建了3个hGle1截短体酵母双杂交重组质粒:pGADT7-hGle1△1-372、pGADT7-hGle1△371-659和pGADT7-hGle1△477-698。酵母双杂交结果表明hGle1的1-372位氨基酸是其与肽链释放因子相互作用必需的结构域。