论文部分内容阅读
目的：通过检测卷烟烟气凝集物(cigarettesmokecondensate,CSC)诱导永生化人支气管上皮细胞(immortalizedhumanbronchialEpithelialcells,BEP2D)恶性转化过程中Notch1、Survivin、CyclinD1的表达；Notch信号阻断剂DBZ作用BEP2D细胞后Notch1、Survivin、CyclinD1的表达；卷烟烟气暴露大鼠不同时间肺组织中Survivin、Notch1的表达，探讨吸烟诱发肺癌过程中的分子机制。方法：1.常规培养BEP2D细胞组（空白对照组）、酒精处理组(溶剂对照组)及经CSC处理后的第10代（P10）、20代（P20）、30代(P30)和第40代(P40)BEP2D细胞组共6组细胞。2.Notch信号阻断剂DBZ作用于P40细胞48h，DMSO作空白对照。3.Westernblot方法检测空白对照组、溶剂对照组及P10、P20、P30、P40细胞中Notch1、Survivin、CyclinD1的表达，及DBZ处理P40细胞48h后的Notch1、Survivin、CyclinD1的表达。4.清洁级的健康Wistar大鼠72只，随机分为2组，一组在正常空气中饲养，另一组暴露于卷烟烟气中，2组分别于饲养1个月、3个月、6个月各处死12只。石蜡切片HE染色观察肺组织气道病理变化，免疫组织化学SP法检测卷烟烟气暴露各月份肺组织中Notch1、Survivin蛋白表达水平。结果：1.Notch1、Survivin、CyclinD1在空白对照组细胞中均不表达；CSC处理各组中Notch1、Survivin及CyclinD1的表达显著高于对照组（P<0.05）；溶剂对照组Notch1和CyclinD1的表达较空白对照组轻度升高（P<0.05），但Survivin的表达无明显变化；Notch1在P10、P20、P30细胞中表达逐渐升高，在P40中表达降低，Survivin的表达随培养代数升高而增强，CyclinD1在P20、P40细胞中高表达（P<0.05）。2.DBZ作用于P40细胞48h后，Notch1、Survivin、CyclinD1的表达较空白对照组显著降低，差异有统计学意义（P<0.05）。3．随着暴露时间的延长，气道受损逐渐加重；Survivin、Notch1在卷烟烟气暴露大鼠1月、3月、6月组的表达较同期对照组显著增高，且随暴露时间的延长逐渐增高。差异有统计学意义（P<0.05）。结论：Notch1、Survivin、CyclinD1参与CSC诱导永生化人支气管上皮细胞恶性转化过程。本研究为吸烟诱发肺癌的发病机制提供理论依据，为吸烟高危人群的预防和早期肺癌的干预提供新思路。