论文部分内容阅读
白僵菌Beauveria是一类重要的生防菌,对许多农林害虫都有良好的控制作用。目前国内多采用液固双相发酵法生产白僵菌,但长期使用发酵法会出现菌种退化问题。白星花金龟Protaetia brevitarsis幼虫为腐食性昆虫,主要以腐烂的秸秆杂草、尾菜烂果、餐厨垃圾等废弃物为食。目前,利用白星花金龟幼虫过腹转化处理上述废弃物的生态循环模式已建立,该循环模式在处理大量农田和餐厨废弃物的同时,还产出了副产品白星花金龟。本研究充分利用这一伴生资源筛选培养高致病力白僵菌菌株,对解决因长期使用发酵法生产白僵菌而出现的菌种退化问题具有重要意义,同时也提升了农田和餐厨废弃物的利用价值。从野外采集的不同种类僵虫上分离得到5株白僵菌菌株,编号为B01、B02、B03、B04、B05,通过系列筛选,最终获得白星花金龟幼虫高致病力菌株。主要研究结果为:1、白僵菌菌株的分离纯化及鉴定将原始菌株纯化,纯化后的菌株接种到PDA培养基上培养,进行形态学观察。通过镜检,观察菌株的菌丝形态、产孢结构、分生孢子形态等;同时进行ITS测序,将所得序列进行同源性比对。结果表明,菌株B01-B04为球孢白僵菌Beauveria bassiana,菌株B05为布氏白僵菌Beauveria brongniartii。2、白僵菌菌株生物学特性的观察对5株白僵菌菌株的菌落直径、产孢量和孢子萌发率进行比较。结果表明,5株白僵菌的菌落直径和产孢量均有显著差异。菌落直径表现为:B05>B04>B03>B01>B02;产孢量表现为:B04>B03>B01>B02>B05,B05菌株的产孢量显著小于其它4株菌株,15天时产孢量仅为0.59×10~7个/cm~2,而B04菌株的产孢量则为2.87×10~7个/cm~2。5株白僵菌的孢子萌发率表现为:B04>B03>B05>B01>B02,其差异性不显著,均在90%以上。综合比较菌株的生长速度、产孢量和孢子萌发率三项指标,得出生物学特性较优异的是B04菌株,虽然B05菌株的生长速度显著高于其它4株菌株,但该菌株产孢量太低。3、白星花金龟幼虫高致病力菌株的筛选将5株白僵菌对白星花金龟幼虫进行室内生物测定,结果表明,不同菌株和孢子浓度均会影响白星花金龟幼虫的死亡率和僵虫率。5株白僵菌达到一定浓度,均可对白星花金龟幼虫造成侵染,但幼虫的死亡率和僵虫率均有显著差异,死亡率表现为:B05>B04>B03>B02>B01,菌株B04和B05之间差异性不显著;僵虫率表现为:B04>B05>B03>B02>B01,菌株B04和B05之间差异性不显著。结合菌株生物学特性和生测结果,综合比较,最后筛选出理想菌株为B04菌株。4、不同接菌方法对白僵菌侵染效果的影响采用直接浸渍法和针刺浸渍法对白星花金龟幼虫进行处理。结果表明,针刺浸渍法处理的幼虫死亡率和僵虫率显著升高,死亡率为86.67%,僵虫率为83.33%;直接浸渍法处理的幼虫死亡率为73.33%,僵虫率为70%,因此选用针刺浸渍法作为白星花金龟幼虫接菌的最佳方法。5、温湿度对白僵菌侵染效果的影响不同的温湿度条件下,白僵菌对幼虫造成的死亡率和感染率也显著不同。在25℃和30℃条件下,菌株B04对白星花金龟幼虫表现出较强的致死力,两种温度下幼虫的死亡率差异性不显著,但僵虫率有显著差异,25℃时幼虫的僵虫率最高,温度为20℃时,幼虫的死亡率和僵虫率较低;随着相对湿度的增加,白星花金龟幼虫死亡率和僵虫率也在升高。在相对湿度为95%时,幼虫的死亡速度最快,僵虫率最高。最后选定的环境条件为温度25℃,相对湿度95%。因此,确定培养白星花金龟幼虫僵虫的最适条件是温度25℃,相对湿度95%。6、白僵菌对松褐天牛幼虫的毒力测定为了测试筛选出的菌株对其它害虫是否有致病力,将B04菌株对松褐天牛Monochamus alternatus幼虫进行毒力测定,结果显示,随着时间的增长,幼虫死亡率在升高,处理30天后,幼虫的死亡率达到72%,感染率为68%,对照组的死亡率为0。