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目的： 1:通过MACS磁珠分选健康人外周血中Treg，利用antiCD3+antiCD28单克隆抗体磁珠加高浓度IL-2体外扩增培养Treg，建立Treg体外扩增平台。 2:研究ICOS在健康人外周血Treg离体培养中的作用，了解mTOR对离体培养Treg ICOS表达的调控。 方法: 1:用MACS磁珠法分选健康人外周血Treg，利用流式细胞仪分析分选纯度;anti-CD3+anti-CD28单克隆抗体磁珠体外扩增Treg，利用流式细胞仪分析培养后Treg纯度;接触抑制试验检测培养后Treg的功能。 2:流式分析Treg存活率和ICOS表达;MACS分选Treg后经anti-CD3+anti-CD28磁珠刺激后第3、7天流式检测Treg表面ICOS表达情况;anti-CD3+anti-CD28抗体或anti-CD3+ICOSLFc刺激3天，流式检测Treg ICOS表达情况;雷帕霉素处理离体培养Treg，流式分析其对Treg ICOS表达作用。CFSE标记人PBMC细胞，并与离体培养Treg混合培养，流式检测Treg的接触抑制活性。 结果: 1:经过MACS免疫磁珠先阴选富集CD4+细胞后再经anti-CD25阳选，CD4+FOXP3+Treg的纯度为(79.9±4.8)％。经14天培养后Treg的纯度为(86±4)％;扩增倍数为:(4.9±1.3)×102倍。培养14天的Treg与CD4+Tcon细胞1∶16比例混合培养时任能抑制CD4+Tcon细胞的增殖。 2:anti-CD3+anti-CD28磁珠刺激Treg3天，ICOS+ Treg中活、死细胞的比例分别为(92±2.69)％和(2.20±0.56)％，在ICOS— Treg中比例为(90.3±3.53)％和(1.77±0.78)％，两者无显著差异;培养第7天，ICOS+ Treg细胞比例从第3天(40.20±1.83)％降至(11.60±1.1)％;anti-CD3+ICOSL-FC刺激Treg3天后，ICOS MFI为(403.3±74.42)，anti-CD3+anti-CD28刺激组为(2410±746.4)， anti-CD3+ICOSL-FC刺激后Treg ICOS表达相比anti-CD3+anti-CD28组显著下降;雷帕霉素处理离体培养Treg细胞3天后，ICOS表达下调。此外，雷帕霉素处理的离体培养Treg均能有效抑制PBMC中Tcon的分裂增殖。 结论: 1:经14天体外刺激培养后Treg扩增300-700倍，且有抑制功能，成功建立健康人外周血Treg体外扩增平台。 2:ICOS表达高低对人外周血Treg存活率影响无显著差异，mTOR信号并非调控人Treg离体培养ICOS表达的唯一因素，CD28协同信号对调控离体培养人Treg ICOS表达比ICOSL信号更为重要，雷帕霉素处理的离体培养人Treg仍具有细胞接触抑制活性。