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葡萄是栽培最广泛的果树之一。在长期的进化和栽培历史中形成了许多种群和品种群,由于葡萄种内变异很大,加上种间的自然杂交以及世界范围内对葡萄的广泛繁殖,使得葡萄的分类鉴定十分困难。 本研究以47 个葡萄栽培品种为试验材料,应用RAPD 分子标记技术,进行葡萄品种的亲缘关系研究,目的在于建立葡萄品种的RAPD反应体系;探讨葡萄品种间的亲缘关系;为杂交育种提供分子学依据。主要结果如下: 1、在传统CTAB 法的基础上,将分类的加入酚的结合剂(PVP 20%)和抗氧化剂(?-巯基乙醇)两类方法组合起来有效去除多酚类杂质;并采用高浓度的盐抑制多糖和DNA 一起沉淀从而分离多糖和DNA的方法,制备的DNA无凝胶状物质、蛋白质和酚类物质,适于PCR 扩增。 2、确定了适合葡萄RAPD 反应的反应体系为:模板DNA为1ul(稀释15 倍),MgCl2 2.0mmol/L,dNTP 0.8 mmol/L,Taq DNA 聚合酶1U,Primer 8pmol,总体积为25ul,剩下的用ddH2O 来补充;确定了适合葡萄RAPD 反应扩增程序为:94℃预变性4 分钟, 94℃变性 45s,37℃退火 55s,72℃ 延伸 80s,40 个循环,72℃ 延伸10 分钟。 3、从100 个引物中筛选出能稳定扩增的30 个引物,用这些引物对47 个葡萄品种进行扩增,均具有多态性,共扩增出216 条带,121 条具有多态性,多态性比例为56.01%。 4、对葡萄属47 个品种及类型进行了RAPD 扩增,根据相似系数进行了聚类分析能将47 个品种聚为5 类:第1 类包括巨峰、红瑞宝、龙宝等巨峰系品种;第2 类包括玫瑰香、红旗特早、达米娜等;第3 类包括美人指、瑞必尔、黑大粒、红地球等;第4 类包括康可、尼加拉、白香蕉等种间杂交和来源不详品种;第5 类包括森田尼无核、克瑞森无核等无核品种。 5、建立了京秀、红旗特早及凤凰51 等品种的DNA指纹图谱,找到了它们的特异谱带,利用不同的引物组合,根据DNA指纹和特异谱带,可将47 个参试品种鉴别出来。 6、RAPD 技术在葡萄品种鉴定和纯度分析上应用的可行性分析 RAPD 是利用一系列引物对整个基因组DNA 进行多态性检测,检测区域几乎可以覆盖整个基因组,可以检测出不同品种间的微小差异。本研究结果表明:葡萄品种间的遗传