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目的检测亲环素A(cyclophilin A,Cy PA)是否通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路调控RAW264.7细胞自噬水平。方法体外培养RAW264.7细胞,分为空白对照组、Cy PA组(1 ng/m L,10ng/m L,100 ng/m L,500 ng/m L,1000 ng/m L)以明确Cy PA的最适浓度,培养24h后蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测自噬相关蛋白LC3的表达;分空白对照组、Cy PA组(100 ng/m L),加入Cy PA后继续培养6h观察Cy PA对各信号通路的影响,Western Blot检测LC3,p-ERK,p-P38,p-JNK,p-PI3K,p-Akt,p-m TOR等蛋白的表达;分空白对照组、Cy PA组、LY294002组、Cy PA+LY294002组观察PI3K/Akt/m TOR信号通路中各蛋白表达的变化,Western Blot检测LC3,p-PI3K,p-Akt,p-m TOR等蛋白的表达。分别用免疫荧光显微镜、电镜观察RAW264.7细胞自噬小体。结果(1)在一定的浓度范围内(1 ng/m L~100 ng/m L),RAW264.7细胞自噬水平随Cy PA浓度的增加而增加,在Cy PA 100ng/m L刺激6h其诱导自噬作用最强(均p<0.05);但当Cy PA浓度继续增大,RAW264.7细胞自噬水平反而降低(p<0.05)。(2)用m RFP-GFP-LC3双荧光标记的腺病毒分别感染RAW264.7细胞。结果表明,Cy PA刺激组的黄色斑点数较对照组明显增多。在电镜下观察发现正常情况下,RAW264.7细胞几乎无自噬小体形成,但当加入Cy PA后,自噬小体形成明显增多。(3)Cy PA刺激组p-PI3K,p-Akt,p-m TOR蛋白的表达较对照组降低(均p<0.05),而p-ERK,p-P38,p-JNK等蛋白的表达两组无明显差异。(4)Cy PA刺激组、LY294002组、Cy PA+LY294002组p-PI3K,p-Aktp-m TOR表达均较对照组减低(均p<0.05)。在荧光显微镜和电镜下亦观察到LY294002组、Cy PA+LY294002组自噬小体较对照组增多。结论(1)Cy PA诱导RAW264.7细胞自噬呈时间和浓度依赖性,在100ng/m L浓度刺激6h时细胞自噬最明显。(2)Cy PA通过PI3K/Akt/m TOR信号通路诱导RAW264.7细胞自噬。