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目的:失血性休克是临床常见的危急重症,多见于外科大血管破裂,腹部损伤引起的肝、脾破裂,消化性溃疡出血及妇产科疾病等,采取积极、有效地处理措施将影响病人的预后。失血性休克的病理生理主要表现为全身缺血/缺氧性损伤,当血容量不足失代偿时可导致多脏器功能障碍;复苏后甚至加重脏器受损表现为不可逆性损伤,有学者将失血性休克/复苏(HS/R)视为全身性缺血再灌注损伤。心肌耐受缺血缺氧能力较强,但机体急剧大量失血及失代偿时仍表现出心功能降低,进一步加重缺血脏器灌注不足;复苏后诱发心脏缺血再灌注损伤,影响体循环血流动力学,不利于预后[1]。心肌缝隙连接(gap junction,GJ)是存在心肌细胞间重要的通讯方式,主要由缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)构成。GJ特点是低电阻,实现了相邻细胞间的电耦联及化学信息交换[2]。GJ通讯受病理生理和药物因素等影响[3,4]。Cx43蛋白的表达、磷酸化状态和分布与GJ通讯功能有着紧密联系[5]。有研究表明,失血前预先给予GJ通道阻滞剂庚醇对缺血心肌产生保护作用[6]。急性心肌缺血时心肌细胞Cx43表达及分布发生变化,可调控细胞生命周期及细胞存亡,然而Cx43蛋白与心肌细胞凋亡的关系,有待加深研究。本课题拟采用新西兰白兔失血性休克复苏模型,探讨失血性休克及复苏致兔心肌损伤时心肌Cx43变化,分析心肌Cx43与心肌细胞凋亡的关系。方法:健康成年雄性新西兰白兔32只,月龄5~7月,体重2.5~3.0 kg,采用随机数字表法,将其分为4组(n=8):假手术组(S组)、失血性休克复苏组(HSR组)、庚醇干预组(HP组)、有机溶剂二甲基亚砜组(DMSO组)。取兔称重后经耳缘静脉按30mg/kg注射3%戊巴比妥钠麻醉,麻醉后固定在兔台,按改良的Wigger’s法制作失血性休克动物模型,休克前30min时HP组经耳缘静脉缓慢注入庚醇(溶于二甲基亚砜有机溶剂)0.6mg/kg,HSR组及S组给予等容量生理盐水,DMSO组给予等容量的DMSO溶液,给药30min后通过左侧股动脉放血,10min内使MAP降至40mm Hg(1mm Hg=0.133k Pa),通过放血或回输放出血液,维持MAP 35~45mm Hg,并持续60 min。然后在20~25min内回输全部失血及等容生理盐水,进行复苏,MAP恢复至基础水平的90%,维持此水平,观察60min。于放血前(T0)、休克30min(T1)、休克60min(T2)、复苏30min(T3)、复苏60min(T4)5个时间点,分别取动脉血样2ml,3500转/min,离心半径10cm,4℃离心15min,分离血浆,取血浆0.2~0.4ml,-20℃保存;复苏60min取完血样后开胸,取心尖部心肌组织,一分为二,一半用4%多聚甲醛溶液固定待测,另一半置于EP管中液氮冻存24 h,再转-80oC冰箱保存待测。采用ELISA法检测血浆cTnI浓度;4%多聚甲醛溶液固定的心肌组织常规脱水、石蜡包埋、切片及HE染色,光镜下观察病理学结果;采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)测定心肌细胞凋亡情况、计算凋亡指数(AI);-80℃冰箱冻存的心肌组织用于Western blot法检测兔心肌组织中Cx43蛋白表达水平。结果:1各组兔心肌组织病理学变化S组兔心肌细胞形态正常,呈椭圆形或短梭形,心肌纤维排列整齐、紧密,细胞核染色均匀,核膜完整;HSR组、DMSO组心肌细胞肥大肿胀,心肌纤维排列不规则,出现断裂,结构紊乱,可见细胞核深染、固缩现象,心肌纤维间隙增宽,间质有大量炎性细胞浸润;与HSR组比较,DMSO组病理性损伤程度无差异;HP组心肌病理性损伤减轻,可见心肌细胞排列规则,心肌细胞轻度水肿偶见点状坏死;2各组兔不同时点血浆cTnI浓度的比较与放血前T0时比较,休克30min(T1)、60min(T2)及复苏30min(T3)、60min(T4)时点S组兔血浆cTnI浓度差异无统计学意义(P>0.05),HSR组兔血浆cTnI浓度升高(P<0.05);与S组比较,HSR组、HP组、DMSO组休克及复苏后各时点兔血浆cTnI浓度升高(P<0.05);与HSR组对应时点比较,HP组血浆cTnI浓度降低(P<0.05),DMSO组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);3各组兔心肌组织中Cx43蛋白表达的比较与S组比较,HSR组、HP组、DMSO组Cx43蛋白表达下调(P<0.05);与HSR组比较,DMSO组上述指标差异无统计学意义(P>0.05),HP组Cx43蛋白表达上调(P<0.05);4各组兔心肌细胞凋亡指数(AI)的比较与S组比较,HSR组、HP组、DMSO组AI升高(P<0.05);与HSR组比较,DMSO组上述指标差异无统计学意义(P>0.05),HP组AI降低(P<0.05)。结论:1 Cx43蛋白在兔失血性休克/复苏致心肌损伤中发挥重要作用。上调Cx43蛋白表达,提高心肌细胞抗凋亡水平,可能是防治HS/R致心肌损伤的新靶点。2庚醇预先给药可减轻兔失血性休克/复苏致心肌损伤,减少心肌细胞凋亡,其机制可能与其抑制GJ通道,使Cx43蛋白表达上调有关。