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目的:近来,miRNAs在卵巢生理学和病理学中的作用引起了人们的关注。一些研究表明miRNAs在卵巢癌的发生、原始卵泡的活化、卵泡发育、卵母细胞成熟和排卵中起重要作用。因此,在本研究中,我们探究了miR-23a在多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome,PCOS)患者和健康妇女血清中的水平差异,以及miR-23a表达水平对卵巢颗粒细胞增殖和凋亡等生物学行为的影响,旨在为miRNAs应用于PCOS诊断和治疗提供有限的理论支持和实验数据。第一章PCOS患者和健康妇女血清中的miR-23a水平方法:收集50名在福建省宁德市闽东医院门诊确诊为PCOS的中国汉族女性(30.98±3.82岁)和50名同期健康年龄匹配的汉族女性(30.76±3.12岁)的血清。测量志愿者的体重和身高,计算体重指数(Body Mass Index,BMI),通过放射免疫测定法测量总睾酮等性激素的水平,并通过qRT-PCR法检测血清中miR-23a水平,最后分析miR-23a血清水平与PCOS患者BMI和性激素水平的相关性。结果:与健康妇女相比,PCOS患者血清中miR-23a水平显著较低(P<0.001)。PCOS患者血清miR-23a水平与患者BMI呈正相关(P=0.0199,r=0.3285),但在健康对照组中未发现这种相关性(P=0.8632,r=0.02499)。此外,PCOS患者血清中促黄体激素(Luteinizing hormone,LH)浓度为9.35±1.77 mIU/mL,显著高于健康妇女血清中的浓度水平(P<0.001)。并且PCOS患者血清miR-23a水平与LH浓度呈负相关(P=0.0088,r=-0.3665),但在健康对照组中未发现这种相关性(P=0.3210,r=0.1432)。结论:本研究显示,与健康对照组相比,PCOS患者血清miR-23a水平较低。此外,我们证实了肥胖和LH浓度水平对于血清miR-23a水平的影响。miR-23a可能具有作为诊断和治疗PCOS的新的靶点的潜能。第二章miR-23a表达与人卵巢颗粒细胞的增殖和凋亡密切相关方法:通过RNA干扰技术,过表达或敲低人卵巢颗粒细胞cov434中miR-23a的表达,随后利用CCK8实验和流式细胞仪分别检测miR-23a表达变化对细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。结果:与正常培养的细胞(control组)相比,miR-23a mimic NC和inhibitor NC的转染并没有引起细胞增殖的显著变化。而miR-23a mimic的转染显著抑制了cov434细胞的增殖(P<0.05);与此相反,miR-23a inhibitor的转染明显促进了cov434细胞的增殖(P<0.05)。此外,转染miR-23a mimic后,细胞大量停滞在G0/G1期,差异显著(P<0.05),S期、G2/M期细胞比例明显减少(P<0.05)。与此相反,转染miR-23a inhibitor后,G2/M期细胞比例明显增多(P<0.05),而G0/G1期和S期细胞比例减少(P<0.05)。并且,miR-23a mimic转染明显增加了早晚期凋亡细胞比例(P<0.05);而miR-23a inhibitor的转染显著降低了早晚期凋亡细胞比例(P<0.05)。结论:本研究表明,人卵巢颗粒细胞cov434中miR-23a的表达水平与细胞的增殖和凋亡密切相关。miR-23a过表达会通过阻滞细胞周期抑制细胞增殖,并促进了细胞凋亡;而miR-23a低表达会通过促进细胞周期进展促进细胞增殖,并抑制了细胞凋亡。第三章FGD4是新的miR-23a的下游靶点方法:利用生物信息学软件Target Scan筛选出FGD4具有潜在的miR-23a结合位点,并通过双荧光素酶报告实验验证两者的直接结合作用。最后利用qRT-PCR和western blot检测miR-23a表达变化对细胞内FGD4 mRNA和蛋白表达的影响。结果:miR-23a mimic的共转染抑制了FGD4-WT质粒的荧光素酶活性(P<0.01),但对FGD4-Mut质粒荧光素酶活性没有抑制作用。该结果表明,miR-23a与FGD4 mRNA确实通过预测位点直接结合。miR-23a mimic的转染显著降低了细胞内FGD4 mRNA和蛋白水平(P<0.01);而miR-23a inhibitor的转染显著增加了细胞内FGD4 mRNA和蛋白水平(P<0.05)。此外,转染miR-23a mimic显著增加了细胞内活化的CDC42(GTP结合)和p-PAK-1的蛋白表达(P<0.01);转染miR-23a inhibitor显著降低了细胞内活化的CDC42(GTP结合)和p-PAK-1的蛋白表达(P<0.05)。结论:在本研究中,我们发现了miR-23a在人卵巢颗粒细胞中的新靶点:FGD4。