红花的组织培养和品质相关基因的克隆及分析

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红花(Carthami Flos)为菊科植物红花(Carthmus tinctorius L.)的干燥管状花,具有抗炎镇痛、扩张冠状动脉、降血压等多种药理作用,临床应用广泛。其中黄酮类成分羟基红花黄色素A (HSYA)是红花的主要活性成分,由此羟基红花黄色素A含量的高低,直接影响红花品质的优劣。因此,从基因水平研究与HSYA生物合成相关的基因,最终从分子水平上定向调控红花品质,为红花的育种提供极大的便利。另外,利用组织培养技术,培育红花的再生再生植株,为快速扩繁红花和验证基因的功能奠定基础。本研究获得的主要结果如下:1.筛选出红花种子的最佳0.1%HgCl2消毒时间为:30分钟;通过对不同部位的外植体(子叶、根、茎、真叶)的诱导比较获知再生体系建立的最佳诱导材料是:子叶;通过试验比较细胞生长素NAA和细胞分裂素6-BA、KT、TDZ不同配比的培养基,筛选获得了最有利于诱导愈伤和诱导形成再生芽的培养基:MS+0.1mg/L NAA+2.0mg/L6-BA+15mg/ LKT和MS+0.1mg/L NAA+2.0mg/L6-BA+20mg/LKT。2.利用高效液相技术完成了对09年红花中HSYA的含量的测定,含量分为0%-2.6%不等.3.采用cDNA末端快速扩增(Rapid amplification of cDNA ends, RACE)技术,首次从红花植物中克隆得到黄烷酮3-羟化酶(F3H)基因。并对该基因进行了蛋白结构的预测和初步的生物信息学分析,F3H基因其全cDNA为1415bp(GenBank登录号:JF737995)包含一个1086bp的开放阅读框(ORF),编码361个氨基酸残基。4.利用实时定量PCR检测了F3H基因在HSYA含量不同的红花样本中的表达差异。发现在F3H在白花(不含HSYA)中的表达远远低于在黄花(含有HSYA)的表达。
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