论文部分内容阅读
第一部分吸入LPS对哮喘小鼠气道炎症和气道黏液分泌的影响目的观察吸入脂多糖(LPS)对哮喘小鼠气道炎症和气道黏液分泌的改变方法清洁级BALB/c小鼠30只随机分为三组：哮喘组(AST组)10只、LPS哮喘组(LPS组)10只和正常组(NS组)10只,哮喘组用卵清白蛋白(OVA)致敏和激发制作哮喘模型,LPS哮喘组在哮喘模型的基础上加用LPS(50ug/ml)雾化吸入30分钟,正常组用生理盐水代替OVA。检测NS组、AST组及LPS组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞总数和细胞分类计数,采用ELISA检测BALF中的IL-4和TNF-α水平,HE染色观察肺部病理学改变,用阿尔辛蓝—过碘酸雪夫(AB-PAS)染色气道杯状细胞,免疫组织化学法检测肺组织中黏蛋白5ac(Muc5ac)以及TLR4的表达,荧光定量RT-PCR检测Muc5acmRNA和TLR4 mRNA在肺内的表达,Western-blotting检测气道muc5ac和TLR4蛋白含量。结果AST组及LPS小鼠较NS组小鼠在BALF中的细胞总数、嗜酸性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞百分比,IL-4和TNF-α水平、肺组织AB-PAS阳染面积,Muc5ac蛋白和mRNA表达明显升高,其差异有统计学意义(P<0.05)。LPS组较AST组在前述气道炎症和气道黏液高分泌指标方面明显增高,其差异有统计学意义(P<0.05)。结论OVA致敏和激发的哮喘小鼠出现以嗜酸性粒细胞、淋巴细胞浸润为主的气道炎症及杯状细胞增生的气道黏液高分泌,且气道炎症和气道黏液高分泌关系密切。LPS组比AST组在气道炎症和气道黏液高分泌方面明显加重,可能与LPS激发了体内炎症介质的生成、活化有关。第二部分TLR4/TRIF信号转导通路在哮喘小鼠气道组织Muc5ac表达中的作用及Dynasore干预的影响目的观察Dynasore干预对LPS哮喘小鼠肺组织TLR4表达及气道muc5ac表达的影响,探讨TLR4/TRIF信号转导通路在哮喘小鼠气道Muc5ac表达中的作用。方法清洁级BALB/c小鼠50只随机分成LPS哮喘组(LPS组)、多粘菌素B组(PMB组)、Dynasore干预组(DYN组)、地塞米松干预组(DEX组)、及溶剂对照组二甲基亚砜组(DMSO组)。每组各10只,PMB组在雾化吸入LPS 1小时之前腹腔注射多粘菌素B(1mg/kg),0.2ml/次,每天一次,连用5天；其余各干预组予以Dynasore (1mg/kg)、地塞米松(2mg/kg)、二甲基亚砜(1mg/kg)代替干预的药物。测定BALF中细胞总数和细胞分类计数,采用ELISA检测BALF中的IL-4和TNF-a水平,通过HE染色观察肺组织病理学改变,AB-PAS对气道杯状细胞进行染色,用免疫组织化学法和WB检测气道Muc5ac和肺组织TLR4蛋白的表达及荧光定量RT-PCR检测Muc5acmRNA、TLR4 mRNA, IFN-βmRNA在肺组织内的表达。结果LPS组较DYN组、PMB组、DEX组在BALF细胞总数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、IL-4含量、TNF-a水平、AB-PAS阳染面积、免疫组化及Western Blot检测Muc5ac和TLR4蛋白表达、Muc5ac、TLR4、IFN-βmRNA表达等增高,其差异有统计学意义(P<0.05)。DMSO组与LPS组两者之间其差异无统计学意义(P>0.05)。结论TLR4/TRIF信号转导通路可能介导哮喘小鼠的慢性气道炎症反应和导致气道黏蛋白基因Muc5ac mRNA的高表达和黏蛋白Muc5ac的高分泌。Dynasore可能通过抑制TLR4/TRIF信号转导通路,使肺组织TLR4、IFN-βmRNA及TLR4蛋白的表达降低而抑制气道炎症和气道黏液高分泌。