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黄连Rhizoma Coptidis.是常用的传统中药材,临床上常用于清热解毒,由善清中焦火热,而黄连的炮制品也在临床上广泛应用,酒黄连善清头目之火,姜黄连具有止呕功效,萸黄连治疗大热之症,不同的黄连炮制品其相应的药理活性也有相应的变化。黄连中主要成分有生物碱,黄酮等,近年来发现黄连中的小分子物质在在某些功效上不能完全代替黄连水煎液。随着对黄连多糖的研究深入,发现黄连多糖具有降糖,抗氧化等作用。本文以雅连为原料,分离纯化了生品雅连多糖,并对其进行理化性质及单糖组成进行了研究,比较了生品雅连多糖和炮制后的多糖免疫活性。主要研究内容及结果如下:1、采用水提取醇沉淀法制备雅连总多糖和炮制后雅总多糖,研究了雅连炮制前后多糖的变化。原药材的多糖的产率为2.08%,炮制后总多糖产率为1.25%。选用硫酸-咔唑法、考马斯亮蓝法测定雅连炮制前后总多糖中糖醛酸和蛋白含量,生品分别为25.90%、2.59%,炮制后分别为33.27%、2.43%。采用Savag法除蛋白后生品和炮制品蛋白含量分别为0.86%、0.82%。2、分离、纯化了 生品雅连多糖,通过 Amberlite FPA90Cl-(Cl-)和 Amberlite FPC3500(H+)阴阳离子树脂串联、DEAECellulose 52柱层析对雅连总多糖进行分离纯化,得到3种多糖C-1、C-2、C-3,经HPLC鉴定证明为均一性多糖,产率分别为0.75%、0.525%、0.675%;高效液相色谱法测定3种均多糖分子量分别为4.85×107 Da、4.33×107 Da、3.85×107Da。3、研究3种雅连多糖结构性质,通过紫外、红外、HPLC、GC-MS等仪器分析方法对分离到的3种均多糖的单糖组成和结构进行初步鉴定。PMP柱前衍生化HPLC分析结果表明C-1的组成单糖为核糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、盐藻糖,其摩尔比为1.2:1.9:4.1:8.2:1,C-2的组成单糖为甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、阿拉伯糖,其摩尔比为2.7:4.3:8.1:8.3:1,C-3的组成单糖为甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖糖醛酸、半乳糖醛酸、木糖,其摩尔比为27.4:22.6:10.6:117.1:31.4:1。5、通过碳粒廓清实验、2,4—二硝基氟苯(DNFB)所致迟发型超敏反应(DTH)、ConA、LPS诱导小鼠脾细胞增殖实验研究雅连多糖的免疫活性,结果表明,生品雅连总多糖不同浓度能够改变碳廓清指数K值和吞噬指数α值,使DNFB所致DTH模型小鼠的耳肿胀率发生变化,发挥多糖免疫调节作用。炮制后雅连总多糖能够升高碳廓清指数K值和吞噬指数α值,DNFB所致DTH模型小鼠的耳肿胀率升高,具有一定的免疫增强作用。生品雅连多糖能够抑制ConA、LPS诱导脾细胞增殖,炮制多糖对ConA、LPS诱导脾皮细胞增殖的抑制作用增强;除蛋白后,生品多糖和炮制雅连多糖对ConA、LPS诱导脾皮细胞增殖有协同抑制作用。分离得到的3种均多糖均对ConA诱导的脾细胞增殖有抑制作用。本文研究比较了雅连酒炙前后多糖化学成分的变化、药理作用的差异性,证明雅连中的生物活性成分并不仅仅是人们一直认为的生物碱类,多糖也具有良好的生物活性。不仅为开发雅连的用药价值奠定基础,还为以后临床指导用药提供依据,进一步开发和保护雅连。