论文部分内容阅读
绵羊精液保存技术使种公羊精液利用不受时间和空间的限制，有利于种质交流和品种资源保存。本文利用计算机辅助分析仪和姬姆萨染色相结合的方法以绵羊精液保存的稀释液为研究重点，通过假阴道方法采集精液，在合格精液中分别添加不同的低温保存和冷冻保存稀释液来筛选绵羊精液低温保存的最佳稀释液配方和冷冻保存的适宜稀释液，并探讨了不同的降温、解冻方法等对精液保存效果的影响，旨在提高绵羊精液保存效果。
将绵羊精液混匀后平均分为三组，分别用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号基础稀释液对精液进行低温保存，其结果表明，在0h时，基础液Ⅱ在VCL参数上显著高于基础液Ⅰ和基础液Ⅲ(P＜0.05)，基础液Ⅰ和基础液Ⅲ则无显著性差异(P＞0.05)。到达48h时，基础液Ⅱ保存的精液全部死亡，基础液Ⅲ在活力、VCL、VAP、ALH和BCF参数上均显著高于基础液Ⅰ(P＜0.05)。保存时间达到72h时，只有基础液Ⅲ保存的精液存活，另外两种基础液保存的精液均死亡。结果表明采用基础液Ⅲ结果最好。
在基础稀释液Ⅲ的基础上分别添加果糖(0.25g、0.75g,1.5g,2.25g)、葡萄糖(0.25g,0.75g、1.5g、2.25g)、乳糖(0.25g,0.75g、1.5g、2.25g)、蔗糖(0.25g、0.75g、1.5g、2.25g)、海藻糖(0.25g,0.75g,1.5g,2.25g)和棉籽糖(0.25g、0.75g、1.5g,2.25g)，通过正交试验的方法，筛选出最佳能量物质的组合。其结果表明，单独添加A(棉籽糖)、B(蔗糖)或C(葡萄糖)时绵羊精液的存活时间和活力显著高于其它糖的添加(P＜0.05)。通过正交方法显示在0h时，配方A4B3C1保存效果最佳;在24h时，配方A2B3C3保存效果最佳;在48h时，配方A2B3C3保存效果最佳;在72h时，配方A2B3C3保存效果最佳;在96h时，配方A2B3C3保存效果最佳;在120h时，配方A2B3C3保存效果最佳。综合以上试验结果可知，最终添加0.25g棉籽糖、0.75g蔗糖和0.75g葡萄糖时对绵羊精液的保存效果最好。
在以基础稀释液Ⅲ和糖的基础上以大豆卵磷脂、甘油和柠檬酸作为稀释液成分对绵羊精液进行低温保存尝试。试验结果表明，对于大豆卵磷脂和甘油来说，精液在稀释液1-10保存过程中，其活力、VCL、VSL、VAP、ALH和BCF参数呈逐渐下降状态，而稀释液4保存的精液无论在哪个时间段其活力均处于最高水平，稀释液7-10精液活力则低于稀释液1-7，并且保存到120h时，稀释液4保存的精液在保存时间上均显著高于其它稀释液(P＜0.05)，在畸形率上显著低于其它稀释液(P＜0.05)。对于柠檬酸的添加量来说，在0h和24h时，精液在不添加酸、添加0.2％、0.4％和0.6％柠檬酸的低温保存稀释液中活力显著高于添加1.0％和1.2％柠檬酸的低温保存稀释液中的精液活力(P＜0.05)，当绵羊精液保存到120h时，只有不加酸的低温保存稀释液组精液存活(P＜0.05)。综合以上结果显示，当稀释液中添加0.375g大豆卵磷脂、0.75mL甘油和不添加柠檬酸时对绵羊精液的保存效果最好。
分别采用无卵黄稀释液OPTIXcell和有卵黄稀释液Optidyl冷冻保存湖羊、白头杜泊、黑头杜泊和澳洲白绵羊精液。试验结果表明:Optidyl冷冻保存湖羊精液的活力和ALH，显著高于白头杜泊羊、黑头杜泊羊和澳洲白绵羊(P＜0.05);OPTIXcell冷冻保存黑头杜泊羊精液的活力、VSL、VAP和BCF，显著高于另外三个品种(P＜0.05);比较两种稀释液冷冻同品种绵羊精液的效果，湖羊VCL和ALH上都要显著高于OPTIXcell无卵黄稀释液(P＜0.05)，而黑头杜泊羊精液冷冻使用OPTIXcel在VSL和VAP的平均值上效果更好。使用Optidyl有卵黄稀释液无论哪个品种，其绵羊精子畸形率的比例都要低于使用OPTIXcell。
综合以上各指标检测结果，每100mL绵羊精液低温保存稀释液中以添加10g脱脂奶粉作为基础液，添加棉籽糖0.25g、蔗糖0.75g和葡萄糖0.75g作为能源物质，同时添加0.375g大豆卵磷脂和0.75mL甘油，用于低温保存绵羊精液的效果较理想。同时，本试验认为冷冻保存湖羊、白头杜泊羊、澳洲白绵羊精液适合采用Optidyl，而黑头杜泊羊精液适合采用OPTIXcell。
将绵羊精液混匀后平均分为三组，分别用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号基础稀释液对精液进行低温保存，其结果表明，在0h时，基础液Ⅱ在VCL参数上显著高于基础液Ⅰ和基础液Ⅲ(P＜0.05)，基础液Ⅰ和基础液Ⅲ则无显著性差异(P＞0.05)。到达48h时，基础液Ⅱ保存的精液全部死亡，基础液Ⅲ在活力、VCL、VAP、ALH和BCF参数上均显著高于基础液Ⅰ(P＜0.05)。保存时间达到72h时，只有基础液Ⅲ保存的精液存活，另外两种基础液保存的精液均死亡。结果表明采用基础液Ⅲ结果最好。
在基础稀释液Ⅲ的基础上分别添加果糖(0.25g、0.75g,1.5g,2.25g)、葡萄糖(0.25g,0.75g、1.5g、2.25g)、乳糖(0.25g,0.75g、1.5g、2.25g)、蔗糖(0.25g、0.75g、1.5g、2.25g)、海藻糖(0.25g,0.75g,1.5g,2.25g)和棉籽糖(0.25g、0.75g、1.5g,2.25g)，通过正交试验的方法，筛选出最佳能量物质的组合。其结果表明，单独添加A(棉籽糖)、B(蔗糖)或C(葡萄糖)时绵羊精液的存活时间和活力显著高于其它糖的添加(P＜0.05)。通过正交方法显示在0h时，配方A4B3C1保存效果最佳;在24h时，配方A2B3C3保存效果最佳;在48h时，配方A2B3C3保存效果最佳;在72h时，配方A2B3C3保存效果最佳;在96h时，配方A2B3C3保存效果最佳;在120h时，配方A2B3C3保存效果最佳。综合以上试验结果可知，最终添加0.25g棉籽糖、0.75g蔗糖和0.75g葡萄糖时对绵羊精液的保存效果最好。
在以基础稀释液Ⅲ和糖的基础上以大豆卵磷脂、甘油和柠檬酸作为稀释液成分对绵羊精液进行低温保存尝试。试验结果表明，对于大豆卵磷脂和甘油来说，精液在稀释液1-10保存过程中，其活力、VCL、VSL、VAP、ALH和BCF参数呈逐渐下降状态，而稀释液4保存的精液无论在哪个时间段其活力均处于最高水平，稀释液7-10精液活力则低于稀释液1-7，并且保存到120h时，稀释液4保存的精液在保存时间上均显著高于其它稀释液(P＜0.05)，在畸形率上显著低于其它稀释液(P＜0.05)。对于柠檬酸的添加量来说，在0h和24h时，精液在不添加酸、添加0.2％、0.4％和0.6％柠檬酸的低温保存稀释液中活力显著高于添加1.0％和1.2％柠檬酸的低温保存稀释液中的精液活力(P＜0.05)，当绵羊精液保存到120h时，只有不加酸的低温保存稀释液组精液存活(P＜0.05)。综合以上结果显示，当稀释液中添加0.375g大豆卵磷脂、0.75mL甘油和不添加柠檬酸时对绵羊精液的保存效果最好。
分别采用无卵黄稀释液OPTIXcell和有卵黄稀释液Optidyl冷冻保存湖羊、白头杜泊、黑头杜泊和澳洲白绵羊精液。试验结果表明:Optidyl冷冻保存湖羊精液的活力和ALH，显著高于白头杜泊羊、黑头杜泊羊和澳洲白绵羊(P＜0.05);OPTIXcell冷冻保存黑头杜泊羊精液的活力、VSL、VAP和BCF，显著高于另外三个品种(P＜0.05);比较两种稀释液冷冻同品种绵羊精液的效果，湖羊VCL和ALH上都要显著高于OPTIXcell无卵黄稀释液(P＜0.05)，而黑头杜泊羊精液冷冻使用OPTIXcel在VSL和VAP的平均值上效果更好。使用Optidyl有卵黄稀释液无论哪个品种，其绵羊精子畸形率的比例都要低于使用OPTIXcell。
综合以上各指标检测结果，每100mL绵羊精液低温保存稀释液中以添加10g脱脂奶粉作为基础液，添加棉籽糖0.25g、蔗糖0.75g和葡萄糖0.75g作为能源物质，同时添加0.375g大豆卵磷脂和0.75mL甘油，用于低温保存绵羊精液的效果较理想。同时，本试验认为冷冻保存湖羊、白头杜泊羊、澳洲白绵羊精液适合采用Optidyl，而黑头杜泊羊精液适合采用OPTIXcell。