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目的:应用RNAi文库建立一种筛选HBV复制相关基因的方法,筛选参与HBV复制的基因,为探讨HBV复制的机理,开发抗乙肝病毒新药提供新的靶点。方法:（1）建立并验证筛选策略:构建HBx-siRNA及HBs-siRNA并感染HepG2.2.15细胞,MEIA法检测细胞上清中HBsAg,HBeAg的表达量,定量RT-PCR检测细胞上清中HBV DNA及细胞内cccDNA的含量,FACS检测细胞表面HBsAg的表达水平。（2）基因筛选并验证:将RNAi文库感染HepG2.2.15细胞,利用免疫磁珠收集HBsAg表达降低的细胞,提取DNA,PCR扩增siRNA编码序列,将PCR产物克隆入T-easy,随机挑选单克隆测序后选取感兴趣的基因,合成其相应的siRNA转入HepG2.2.15细胞内进行验证。Western blot检测被抑制基因编码的蛋白表达水平,MEIA法及定量RT-PCR检测HBV复制情况,FACS检测细胞表面HBsAg的表达水平。结果:（1）HBx-siRNA及HBs-siRNA感染HepG2.2.15细胞后细胞上清中病毒蛋白（HBsAg,HBeAg）及HBV DNA表达量均低于对照组,细胞内cccDNA的相对表达量也较对照组下降。FACS结果提示抑制HBx或HBs的表达均能够降低HepG2.2.15细胞表面HBsAg的表达量。（2）在随机挑选的克隆中成功测序20个,其中一个克隆含有DDB1的编码序列（可能参与HBV复制）,另一个克隆含有KIAA1919的编码序列,余下18个克隆的序列不能定位于任何基因。构建DDB1-siRNA并转染HepG2.2.15细胞后Western blot检测显示DDB1蛋白被抑制;MEIA法及定量RT-PCR显示细胞上清中病毒蛋白（HBsAg,HBeAg）及HBV DNA表达量均低于对照组;细胞内cccDNA的相对表达量较转染前明显下降;FACS结果也显示抑制DDB1的表达能够降低HepG2.2.15细胞表面HBsAg的表达量。结论:本试验建立了一种筛选HBV复制相关基因的方法,证实DDB1基因能增强HBV复制,为大规模、全基因组筛选参与HBV复制的基因奠定了基础。