结直肠癌是一种常见的消化系统恶性肿瘤。据WHO统计2008年全球大肠癌新发病例约120万人,死亡病例约608700人。欧洲国家平均每年有20万人死于结直肠癌,在所有恶性肿瘤中死亡率位居第二。结直肠癌的发病率以及死亡率在我国有明显的上升趋向。因为特异性的临床表现在疾病的早期阶段并不明显,较多患者一直到出现消瘦、血便、腹痛等临床表现时才就医,而就医的患者中大约有80%明确时就已出现了转移,耽误了最好的治疗机会。因此,寻找结直肠癌的早期分子标志物成为研究热点,这些研究将有助于结直肠癌的早期临床诊断和预后评价。Klotho蛋白是新近发现的一种抗衰老相关蛋白,与多种慢性疾病及衰老相关性疾病关系密切。Klotho蛋白具有抗衰老、调节钙磷代谢等作用。近年研究提示Klotho蛋白与多种肿瘤的发生、发展密切相关。我们前期研究表明Klotho mRNA在结肠癌细胞株中普遍低表达或沉默表达。Klotho蛋白在结肠上皮癌变过程中的动态变化及其与结直肠癌患者的临床病理特征关系尚未有报道。本课题采用免疫组化法对人和小鼠的结直肠癌、结直肠腺瘤和结直肠正常组织Klotho蛋白的表达进行动态检测,初步探讨其在结直肠癌发生发展中的作用及其临床意义。研究方法1.收集73例结直肠腺癌组织和癌旁组织,110例结直肠腺瘤组织和20例正常结肠粘膜组织,采用免疫组化法检测Klotho蛋白的表达情况,详细记录年龄、性别、肿瘤位置、分化程度、TNM分期、淋巴结转移等相关的临床病理资料,并随访73例结直肠腺癌病人的生存预后情况,分析Klotho蛋白在结直肠癌发生过程中的变化及其与各项临床病理参数的关系。2.使用氧化偶氮甲烷(AOM)+葡聚糖硫酸钠(DSS)构建原位结肠癌模型,将12只五周龄雄性C57BL/6小鼠,随机分为正常组和模型组。实验组小鼠第一天(D1)单剂量腹腔注射AOM(10mg/kg)一次,一周后(D8)正常饮用水换为含有3%DSS的饮用水,连续饮用5天,D12恢复正常饮用水16天,21天作为一个DSS周期,一共进行三个DSS周期。对照组腹腔注射与AOM同体积的生理盐水,正常饮用水直至建模结束,实验组和对照组均正常饮食。第10周建模结束,收集小鼠结肠组织作病理检测,免疫组化法检测Klotho蛋白表达水平。研究结果1.研究共纳入276例研究对象,其中结肠腺癌及配对癌旁组织各73例,结肠腺瘤110例,健康对照20例。平均年龄60.5岁,在73例结直肠腺癌中,男性41例,女性28例,平均年龄62.97±11.42岁;在110例结直肠腺瘤中,男性72例,女性38例,平均年龄56.47±9.27岁;在20例健康体检者中,男性14例,女16例,平均年龄49.9±13.02岁。三组间一般资料无统计学差异。2.免疫组化检测发现Klotho蛋白从正常→腺瘤→腺癌组织逐渐下降。结直肠癌患者中,肿瘤的分化程度、淋巴结转移、远处转移和TNM分期与Klotho蛋白的表达显著相关(P<0.05)。3.采用AOM+DSS成功构建肠炎相关性结肠癌小鼠模型,免疫组化染色检测结果发现正常→不典型增生或腺瘤→肠癌过程中,Klotho的表达水平呈逐步下降趋势。研究结论从正常组织到结肠腺瘤至癌变过程中,Klotho的蛋白表达水平逐渐下降。Klotho表达下调是结直肠肿瘤发生的早期标志事件。