大黄鱼(Pseudosciaena crocea)是我国特有的经济鱼种,以其味道鲜美,营养丰富和极高的药用价值而受到青睐。人工养殖迅猛发展,养殖规模的不断扩大和养殖环境日益恶化,导致病害频发,由此造成的经济损失也十分严重。因此,加强对大黄鱼免疫学理论的基础研究,了解其抗病免疫机制,对于大黄鱼病害防治十分重要。Toll样受体(Toll-like receptors, TLRs)通过识别病原体结构中保守的病原分子模式(PAMP)构成了机体抗感染的第一道防线。TLRs通过对病原识别后,与下游的接头因子MyD88、TRAF6结合,激活下游的炎症效应因子杀灭病原体。TLRs信号传导途径以反应快、作用广,在抵抗病原体的侵袭中发挥更重要的作用,并对获得性免疫的发生和类型起重要的调节作用。本研究利用RT-PCR和RACE-PCR技术克隆了大黄鱼TLR9、MyD88、TRAF6基因全长cDNA序列,研究了它们在大黄鱼不同组织的表达谱。病原菌溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)免疫刺激后,采用Real-Time PCR分析了免疫刺激不同时间后大黄鱼脾脏、血液及肝脏中TLR9, MyD88, TRAF6在转录水平上的表达变化。结果表明：(1)大黄鱼TLR9基因分为A和B两种类型。TLR9A cDNA全长3637 bp,编码区3171 bp可编码1056个氨基酸,预测分子量121.385 kDa; TLR9B cDNA 3756 bp,编码区3021 bp可编码1006个氨基酸,预测分子量115.247 kDa。TLR9A与TLR9B存在LRR及TIR功能结构域,TIR结构域高度保守。TLR9A型TIR结构域包含3个保守的Box,与TLR9A相比TLR9B的TIR功能结构域区域较短,缺少保守的Box3。(2)MyD88基因cDNA全长1574 bp,编码区864 bp编码287个氨基酸的蛋白前体,预测分子量为33.075 kDa。(3)TRAF6 cDNA全长2013 bp,编码区1725 bp,可编码574个氨基酸的蛋白前体,预测分子量为64.727 kDa。(4)对上述基因的组织表达谱的结果表明,TLR9A、TLR9B、MyD88、TRAF6作为同一信号传导通路的基因,广泛存在于大黄鱼的大部分组织,并且表现出相似的表达特征：其中,脾脏中表达量最高,肌肉中表达量最低。溶藻弧菌诱导后,大黄鱼脾脏、肝脏、血液中TLR9A、TLR9B和MyD88基因表达量变化显著；血液中TRAF6基因表达量变化显著,而脾脏和肝脏中TRAF6基因表达量变化未达到显著水平。提示TLRs信号传导途径在大黄鱼的免疫反应中具有重要作用。