猪瘟(Classical swine fever,CSF)是一种高传染性、高致病性和高致死率的病毒性传染病,危害猪和野猪。猪瘟因其发病特点,给许多国家的养猪业都造成了极大的经济损失,因此猪瘟被世界动物卫生组织列为A类法定传染病。猪瘟是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一种病毒性传染病,该病毒是黄病毒科、瘟病毒属的一员。CSFV是一种单股正链的RNA病毒,外层有囊膜结构,病毒粒子直径为40~60 nm,其基因组大小约为12.3 kb。CSFV基因组结构主要由三部分组成,依次为5’非编码区(5’untranslated region,5’UTR)、能够编码约3900个氨基酸残基的多聚蛋白的开放阅读框(ORF)和3’非编码区(3’untranslated region,3’UTR)。其中,5’UTR和3’UTR在病毒基因组RNA复制和翻译中都起到了重要的作用。将CSFV强毒株Shimen株和弱毒株HCLV进行序列比对,发现弱毒株HCLV在3’UTR的58到69位点之间插入了12个核苷酸序列,这是造成CSFV毒力强弱的一个重要因素。在本实验中,用双荧光素酶报告基因检测系统进行CSFV非编码区结构功能的研究。分别构建了Shimen株和HCLV株的5’UTR和3’UTR调节的荧光素酶表达载体,并进行比对分析。结果显示,弱毒株HCLV的5’UTR和3’UTR对荧光素酶表达抑制作用不及强毒株Shimen,说明CSFV毒性的强弱确实与非编码区相关。为了研究CSFV 3’UTR在调节猪瘟病毒翻译过程中的作用机制,本实验对3’UTR进行了一系列的截短研究。发现其抑制翻译作用的区域主要位于核苷酸80-106区间,该区域富含AU,即ARE结构域。通过生物信息技术分析发现,在ARE下游的112-139位点有潜在的microRNA ssc-let-7结合处。实验结果显示,单独的ssc-let-7结合区不能对3’UTR产生明显的抑制作用,但ARE-let7对3’UTR的抑制效果会显著增强,说明ssc-let-7可能只有在ARE存在的情况下,才能有协同抑制猪瘟病毒翻译的作用。由于ARE缺失会增强3’UTR的抑制作用,暗示宿主细胞中有些蛋白结合于此处调节猪瘟病毒的翻译,降低ARE区对病毒翻译的抑制。本研究表明HuR就是这样一种蛋白。当HuR蛋白过表达时,ARE对翻译的抑制效果明显减弱。反之,当把HuR蛋白干涉后,发现ARE对荧光素酶的表达的抑制作用增强。由此可知,宿主细胞中的HuR与CSFV3’UTR区的ARE结合后,能增强CSFV的翻译作用。总之,猪瘟病毒3’UTR能抑制其在宿主细胞中的翻译,而且ARE区在其调节病毒的翻译过程中起着最主要的作用。猪瘟病毒也能雇佣一些宿主细胞的蛋白,如HuR来调节其蛋白的翻译。