【摘 要】
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本论文选用广东省稻瘟病菌ZCi3中2个具有一定致病力分化的菌株01．198a(ZCl3-1)和01-98a(ZCl3-2)为材料，进行细胞壁中水溶性激发子分离、纯化、检测，并对其性质进行了研究。在实验中，以C039和C0101ASl作为激发子活性指示材料，并通过SDS-PAGE电泳和MALDI．TOFMS等技术对来自2个菌株的糖蛋白激发子进行了分析，然后与纪春燕(2004)纯化得到的CBSl(MG
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本论文选用广东省稻瘟病菌ZCi3中2个具有一定致病力分化的菌株01．198a(ZCl3-1)和01-98a(ZCl3-2)为材料，进行细胞壁中水溶性激发子分离、纯化、检测，并对其性质进行了研究。在实验中，以C039和C0101ASl作为激发子活性指示材料，并通过SDS-PAGE电泳和MALDI．TOFMS等技术对来自2个菌株的糖蛋白激发子进行了分析，然后与纪春燕(2004)纯化得到的CBSl(MGJ2)的MALDITOFMS鉴定结果比较研究。
L以C039为背景的水稻抗稻瘟病近等基因系，分别为C101A51(含P／-2抗稻瘟病基因)，C101LAC(含／／-1抗稻瘟病基因)，C104PKT(含／／-3抗稻瘟病基因)及背景品系C039(不含已知抗病基因，为感病对照)，对2个菌株ZCl3-1和ZCl3-2进行致病力测定。
2．经过多次冻融、机械破碎、离心、PM-10膜高压超滤等步骤，从稻瘟病菌2个菌株中提取出稻瘟病菌粗激发子CEF-ZC13-1和CEF-ZCl3-2，活性检测表明，都具有激发子活性。
3．将2个粗提激发子分别经过HiTrap16／10DEAE-SepharoseFF阴离子交换柱层析，在A280nm检测，均发现有3个吸收峰(D1、D2、D3)，其中D3峰经过检测对水稻叶片POD活性具有诱导作用，表明具有激发子活性，收集峰尖样品即为激发子D3-ZCl3-1和D3-ZCl3-2。
4．激发子D3-ZCl3-1和D3-ZCl3-2分别经过SephacrylS-100凝胶柱层析，在A280am检测，前者发现4个吸收峰S1、S2、S3和S4，后者则发现有2个吸收峰S1和S2，其中两者的S1峰经检测对水稻叶片POD活性具有诱导作用，表明具有激发子活性，收集S1峰尖样品即为激发子Si-ZCl3．1和S1-ZCl3-2。
5．对粗激发子CEF-ZCl3-1、CEF-ZCi3-2，初步纯化激发子D3-ZCl3-1、D3-ZCl3-2，以及最后纯化得到的激发子SI-ZCl3-1和S1-ZCl3-2进行SDS-PAGE电泳检测，发现其组分逐步得到纯化，激发子SI-ZCl3-1和S1-ZCl3-2只有一条蛋白条带，达到了电泳纯，测得其相对分子量为102kDa。
6．分别用粗提激发子CEF-ZCl3-1、CEF-ZCl3-2，初步纯化激发子D3-ZCl3．1、D3-ZCl3-2，以及最后纯化所得到激发子S1-ZCl3-1和S1-ZCl3-2处理水稻叶片，发现均能使水稻POD活性的增加。随着激发子不断的纯化，其诱导POD活性升高的幅度也加大。来自2个菌株的各步纯化激发子诱导水稻POD活性的增加幅度接近。
7．对2个最终纯化的激发子S1-ZCl3-1和SI-ZCl3-2进行MALDITOFMS检测，均推断为稻瘟菌蛋白库中的hypotheticalproteinMG07877．4(登陆号是：gi39973165)，得分分别是114和129，该蛋白的分子量是78557Da，等电点是4．93。与本实验室纪春燕(2004)纯化的稻瘟病菌生理小种ZCl3的一个激发子CBSl(MGJ2)推断结果一致。
8．对CBSl、S1-ZCl3-1和S1-ZCl3-2三者与hypotheticalproteinMG07877．4相匹配的肽段进行比较，发现三者都有共同重叠部分，其中相匹配的重叠的肽段为7段，相匹配的氨基酸残基个数为121，占总氨基酸残基数的16．85％。
9．本研究与本实验室2004年在稻瘟病菌小种ZCl3上提取的糖蛋白激发子CSBl进行联合分析推断：稻瘟菌染色体III重叠群21461中MG07877．4开放阅读框(ORF)编码的hypotheticalproteinMG07877．4是激发子糖蛋白。
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