砷中毒大鼠空肠SP、SS、VIP、CD4、TNF-α免疫反应阳性细胞的表达及形态学研究

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目的:探讨慢性砷中毒对大鼠空肠表达P物质(SP)、生长抑素(SS)、血管活性肠肽(VIP)、CD4、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)免疫反应阳性细胞的影响及与空肠形态结构改变的关系。  方法:将60只清洁级 SD大鼠,分为对照组(0.0 mg/kg)、低砷组(0.4mg/kg)、高砷组(10.0 mg/kg),分别自由饮用As2O3与蒸馏水配制的染毒水溶液,浓度分别为0、2、50 mg/L,连续染毒4个月。采用HE染色、PAS反应观察砷中毒大鼠空肠一般形态结构变化、免疫组化SABC法显示SP、SS、VIP、CD4、TNF-α免疫反应阳性细胞,Biomias图象分析软件检测空肠纹状缘厚度,SP、SS、CD4、TNF-α免疫反应阳性细胞数及平均灰度值;VIP免疫反应阳性细胞、阳性神经纤维面积及平均灰度值。  结果:1.对照组大鼠进食饮水正常,毛发光泽,精神状态良好;染砷组量染砷组大鼠毛发粗糙,精神萎靡,易激惹,体重降低。高、低剂量染砷组大鼠尿砷、血砷浓度(7366.6±1086.50、31.59±9.24)ug/L、(1744.31±300.12、16.58±2.08)ug/L高于对照组(18.97±3.58、5.44±3.36)ug/L,p<0.05,3组对比差异有统计学意义。2.HE染色观察,染砷组大鼠空肠绒毛结构不规则;固有层内有炎性细胞浸润,血管扩张。3. PAS反应观察,染砷组纹状缘不整齐,变薄,油镜下测量纹状缘厚度,高、低剂量染砷组(2.06±0.13)、(2.29±0.13)低于对照组(2.83±0.18),p<0.05,3组对比差异有统计学意义。4.免疫组织化学SABC法显示:①3组大鼠空肠SP免疫反应阳性细胞计数比较,其中高、低剂量组染砷组(4.24±0.33)、(1.85±0.25)个/视野,高于对照组(0.94±0.21)个/视野,p<0.05,差异有统计学意义。3组大鼠免疫反应阳性细胞灰度值比较,高、低剂量染砷组(118.30±4.58)、(125.13±2.35)低于对照组(133.76±3.61),p<0.05,差异有统计学意义。②3组大鼠空肠 SS免疫反应阳性细胞计数比较,高、低剂量染砷组(3.31±0.41)、(1.83±0.24)个/视野,高于对照组(1.14±0.14)个/视野,p<0.05,差异有统计学意义。3组大鼠免疫反应阳性细胞灰度值比较,高、低剂量染砷组(124.03±3.94)、(131.28±5.66)低于对照组(137.57±5.49),p<0.05,差异有统计学意义。③3组大鼠空肠VIP免疫反应阳性细胞及阳性神经纤维面积比较,高、低剂量组染砷组(643.17±54.69)、(252.07±42.96),高于对照组(113.80±24.04),p<0.05,差异有统计学意义。3组大鼠免疫反应阳性细胞及阳性神经纤维平均灰度值比较,高、低剂量染砷组(103.17±4.74)、(114.42±2.59)低于对照组(126.78±3.62),p<0.05,差异有统计学意义。④3组大鼠空肠CD4免疫反应阳性反应细胞计数统计,与对照组(9.22±1.30)个/视野比较,低剂量染砷组(14.40±2.33)个/视野增高、高剂量组(5.52±1.44)个/视野降低,p<0.05,差异有统计学意义。3组大鼠CD4免疫反应阳性细胞灰度值统计,与对照组(116.60±3.22)比较,低剂量染砷组(105.50±5.29)降低,高剂量染砷组(121.22±3.71)增高,p<0.05,差异有统计学意义。⑤3组大鼠空肠TNF-α免疫反应阳性细胞计数比较,高、低剂量组染砷组(11.60±1.00)、(9.09±1.30)个/视野,高于对照组(5.59±0.89)个/视野,p<0.05,差异有统计学意义。3组大鼠免疫反应阳性细胞灰度值比较,高、低剂量染砷组(102.11±2.32)、(114.256±3.39)低于对照组(127.94±3.96),p<0.05,差异有统计学意义。  结论:1、砷中毒可致大鼠空肠结构损伤;2、砷中毒可致大鼠空肠内SP、SS、TNF-α免疫阳性细胞计数增多,VIP免疫反应阳性细胞及阳性纤维面积增大,SP、SS、VIP、TNF-α表达增强;3、低剂量砷中毒可致大鼠空肠CD4免疫反应阳性细胞表达增多,高剂量砷中毒可致大鼠空肠 CD4免疫反应阳性细胞表达降低;4、砷中毒可影响大鼠空肠内分泌及免疫系统功能。
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