聚(甲基丙烯酸环氧丙酯—二乙烯基苯)微球的表面改性及其作为蛋白质疏水层析介质的评价

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高分子聚合物微球作为层析介质的载体因其具有较好的机械强度、化学稳定性以及相对低廉的价格,越来越受到人们的关注。但聚合物型载体经常含有疏水性骨架,存在与蛋白质之间的不可逆吸附作用。因此,这种载体在制备过程中还应包括对载体表面的改性处理,以提高其生物相容性。以甲基丙烯酸环氧丙酯为主要单体的聚合物微球是一种新型的层析材料,微球表面富含高反应活性的环氧基,通过环氧基与修饰剂的共价反应可以将修饰剂偶联到微球上,从而对微球进行表面改性。本论文以甲基丙烯酸环氧丙酯(Glycidyl Methacrylate, GMA)为主要单体,二乙烯基苯为交联剂(Divinylbenzene, DVB),用悬浮聚合的方法合成了聚(甲基丙烯酸环氧丙酯-二乙烯基苯)[P(GMA-DVB)]微球。为了消除微球界面与蛋白质等生物大分子之间的非特异性吸附作用,本论文探索了用不同分子量的聚乙二醇(Polyethylene Glycol, PEG)对微球进行改性,制备了带有PEG配基的P(GMA-DVB)微球。论文中考察了反应条件对PEG固载量的影响规律,确定了最佳反应条件,并结合聚合物自身的结构特点,建立了一种新的配基密度的检测方法。论文中以牛血清白蛋白(Bovine serum albumin, BSA)和胰蛋白酶作为模型蛋白,考察了PEG改性前、后P(GMA-DVB)微球对蛋白质的吸附性能。研究发现,用PEG改性后的微球对蛋白质的吸附作用表现为可逆的疏水相互作用。改性前P(GMA-DVB)微球有30-40%的不可逆吸附,蛋白质回收率仅为60-70%。改性后介质消除了不可逆吸附,吸附BSA和胰蛋白酶的质量和活性回收率都在97%以上。改性微球填装层析柱后,其压力流速关系显示介质具有均匀的粒度、良好的机械强度和很好的渗透性。吸附胰蛋白酶的动态饱和吸附量约为32.9mg·g"1,是静态饱和吸附量的62%。与市售的琼脂糖疏水介质相比较,改性介质的优势在于:能耐高压、耐高流速;成本相对较低;酸碱条件下都很稳定,便于再生;有比较高的吸附容量。论文研究结果表明,PEG改性的P(GMA-DVB)微球可以作为一种新型疏水层析介质应用于蛋白质的吸附与分离。
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