化浊解毒方对肝纤维化大鼠血清中TGF-β1及肝组织中CTGF的作用研究

来源 :河北医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:panshuangchun
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目的:观察化浊解毒方对肝纤维化大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)水平的影响;探讨化浊解毒方对实验大鼠肝纤维化的防治作用及其机理,为化浊解毒方在临床的广泛应用提供理论依据。方法:建立DMN肝纤维化大鼠模型,清洁级SD大鼠70只,雄性,体重(200±20g)随机分为正常对照组(n=10),模型对照组(n=20),鳖甲软肝片组(n=10),化浊解毒方低、中、高剂量组,每组10只。适应性喂养1周后,除正常对照组外均给予1%DMN10mg/kg体重腹腔内注射,共13次,实验第1周连续用药3日,1次/日;第2-6周每周连续用药2日,1次/日,每周固定开始给药时间为周一上午9:00。至第4周末,大鼠中度肝纤维化模型建成。给药:从第4周开始至8周末,正常组、模型对照组,给予生理盐水10ml/kg灌胃,日1次,;化浊解毒方低、中、高剂量组分别给予含药量为1.35g/ml、2.7g/ml、5.4g/ml的生药水煎剂灌胃,灌胃液体量为10ml/kg,1次/d。鳖甲软肝片组,临用时研末以蒸馏水配成混悬液,用药量为0.154mg/kg,1次/d。于8周结束时,从腹主动脉取血,分离出血清。迅速解剖出肝脏,观察肝脏的颜色、质地,沿肝脏长轴切取约2mm厚的肝组织放入10%中性福尔马林中固定,常规制备肝组织切片,切片厚度约4μm。部分肝组织用生理盐水漂洗数次后,滤纸吸干,称取0.5g,常规制备肝组织匀浆。然后3000r/min4℃离心,取上清液,-20℃冰箱保存备用,用前恢复至室温。采用免疫吸附法检测大鼠血清中TGFβ1、肝组织匀浆中CTGF的水平。数据用均数±标准差(x±s)表示,运用SPSS13.0统计软件处理。两个样本均数比较采用t检验,多个样本均数比较行完全随机设计单因素方差分析。结果:1一般情况正常对照组大鼠进食良好,皮毛顺滑有光泽,精神状态良好,喜动,体重逐步增长。模型对照组大鼠进食不佳、精神不振、皮毛干枯黯淡、小便色黄,体重较前稍有增加,但较正常组轻。各治疗组大鼠进食尚好、精神亦可、活动状态尚可,体重逐渐增加,与正常组差别不显著。2化浊解毒方对肝纤维化大鼠肝脏病理形态学的影响正常组大鼠肝脏质地软,边缘锐圆,表面光滑,新鲜,颜色略深红,未发现斑点、突起。模型组大鼠肝脏肿大明显,质硬,呈暗红色,表面粗糙,边缘较钝。各治疗组大鼠肝脏肿大不甚明显,质地较脆,略呈暗红色,表面较光滑,偶有细沙粒状增生。光镜下,正常组大鼠肝小叶排列规整,纤维组织含量极少。模型组大鼠肝细胞变性、坏死,纤维组织大量增生,肝小叶结构破坏。各治疗组与模型组比较,肝脏损伤程度均较轻,但各治疗组之间无明显病理形态学差别。3化浊解毒方对肝纤维化大鼠血清中TGF-β1水平的影响模型组与正常组比较,差异具有统计学意义且差异显著(P<0.01);各治疗组与模型组比较,除高剂量组外差异均有统计学意义(P<0.05),其中化浊解毒方中剂量组有显著差异(P<0.01)。4化浊解毒方对肝纤维化大鼠肝组织中CTGF水平的影响模型组与正常组比较,差异有统计学意义且差异显著(P<0.01);各治疗组与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),其中化浊解毒方中剂量组差异显著(P<0.01);结论:1化浊解毒方可以降低大鼠肝组织的炎症、纤维化程度发展,改善其一般状况,表现出良好的保肝护肝,防纤维化作用。2化浊解毒方能显著降低大鼠血清中的TGFβ1及肝组织CTGF水平的作用可能是化浊解毒方的抗纤维化作用机理之一,通过减少TGF-β1、CTGF的含量,使HSC的激活受到抑制,从而细胞外基质的合成减少,ECM降解增多,防止其过度堆积而发挥其抗肝纤维化生物学作用。
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