目的： 1.观察角质细胞生长因子对老龄鼠萎缩胸腺的增殖作用。 2.观察角质细胞生长因子对放疗所致萎缩胸腺的增殖作用。 3.观察角质细胞生长因子对环磷酰胺引起萎缩胸腺的增殖作用。 4.观察体外培养的情况下，角质细胞生长因子对胸腺上皮髓质来源1C6细胞和皮质来源4C18细胞的增殖作用。 5.检测胸腺上皮细胞来源1C6和4C18细胞中KGF受体mRNA表达情况。 方法： 1、15个月BALB/C雄性老龄鼠10只，随机分为KOF处理组和对照组，每组各5只，连续7天分别给予皮下注射KGF(5 mg·kg-1·d-1)和生理盐水，4周后检测小鼠胸腺和脾脏、淋巴结的细胞总数，流式细胞仪分别检测胸腺组织中CD4单阳性(CD4SP)、CD8单阳性(CDSSP)、CD4CD8双阳性(DP)、CD4CD8双阴性(DN)以及脾脏、淋巴结和外周血中CD4SP、CD8SP各T细胞亚群的比例。 2、正常BALB/C雄性小鼠15只，随机分为KGF处理组，对照组和正常组，每组各5只，KGF处理组和对照组均先给予4.5Gy钴射线照射，24小时后分别连续7天给予皮下注射KGF(5 mg·kg-1·d-1)和生理盐水，正常组不经过任何处理。4周后检测小鼠胸腺和脾脏、淋巴结的细胞总数，流式细胞仪分别检测胸腺组织中CD4单阳性(CD4SP)、CD8单阳性(CD8SP)、CD4CD8双阳性(DP)、CD4CD8双阴性(DN)以及脾脏、淋巴结和外周血中CD4SP、CDSSP各T细胞亚群的比例。 3、正常BALB/C雄性小鼠10只，随机分为KGF处理组和对照组，每组各5只，KGF处理组和对照组均先腹腔注射环磷酰胺(300 mg/kg)3天，24小时后再分别连续7天给予皮下注射KGF(5 mg·kg-1·d-1)和生理盐水。2周后检测小鼠胸腺和脾脏、淋巴结的细胞总数，流式细胞仪分别检测胸腺组织中CD4单阳性(CD4SP)、CD8单阳性(CDSSP)、CD4CD8双阳性(DP)、CD4CD8双阴性(DN)以及脾脏、淋巴结和外周血中CD4SP、CDSSP各T细胞亚群的比例。 4、体外实验：鼠胸腺上皮髓质来源1C6细胞和皮质来源4C18细胞，分别经含不同浓度(25、50、100、200、400、800 ng/ml)的KGF和不含KGF的完全培养液(对照组)作用48小时和72小时，采用噻唑蓝(MTT)法分析细胞增殖活性。 5、RT-PCR技术和琼脂糖凝胶电泳实验检测胸腺上皮髓质来源的1C6细胞和皮质来源的4C18细胞中KGF受体mRNA表达情况。 结果： 1、在老龄鼠的实验中，细胞计数和流式细胞仪检测显示，与对照组相比，KGF处理组平均胸腺细胞总数和CD4SP、CD8SP、DP、DN各T细胞亚群的平均细胞数以及KGF处理组平均脾细胞总数和CD4SP、CDSSP各T细胞亚群的平均细胞数均有明显增加(均P<0.05)，但是KGF处理组淋巴结平均细胞总数和CD4SP、CD8SP各T细胞亚群的平均细胞数以及外周血中CD4SP、CD8SP各T细胞亚群的比例没有显著变化。 2、放疗处理实验中，细胞计数和流式细胞仪检测显示，与对照组相比，KGF处理组平均胸腺细胞总数和CD4SP、CD8SP、DP、DN各T细胞亚群的平均细胞数以及KGF处理组平均脾细胞总数和CD4SP、CD8SP各T细胞亚群的平均细胞数均有明显增加(均P<0.05)，但是KGF处理组淋巴结平均细胞总数和CD4SP、CD8SP各T细胞亚群的平均细胞数以及外周血中CD4SP、CD8SP各T细胞亚群的比例没有显著变化。与正常组相比，KGF处理组各值均没有显著变化。 3、环磷酰胺处理实验中，细胞计数和流式细胞仪检测显示，与对照组相比，KGF处理组平均胸腺细胞总数和CD4SP、CDSSP、DP、DN各T细胞亚群的平均细胞数以及KGF处理组平均脾细胞总数和CD4SP、CD8SP各T细胞亚群的平均细胞数均有明显增加(均P<0.05)，但是KGF处理组淋巴结平均细胞总数和CD4SP、CDSSP各T细胞亚群的平均细胞数以及外周血中CD4SP、CD8SP各T细胞亚群的比例没有显著变化。 4、MTT法检测显示，在低浓度(<200 ng/ml)时，1C6细胞增殖率随KGF浓度的增加不断升高；当KGF浓度为200 ng/ml时，1C6细胞增殖率达到最高值；而在高浓度(>200 ng/ml)时，1C6细胞增殖率随KGF浓度的增加又逐渐下降；与对照组比较，浓度为100、200、400ng/ml的KGF对1C6细胞具有明显的促增殖作用(均P<0.05)。而在低浓度(<100 ng/ml)时，4C18细胞增殖率随KGF浓度的增加不断升高；当KGF浓度为100 ng/ml时，4C18细胞增殖率达到最高值；而在高浓度(>100 ng/ml)时，4C18细胞增殖率随KGF浓度的增加又逐渐下降；与对照组比较，浓度为50、100、200、400 ng/ml的KGF对4C18细胞具有明显的促增殖作用(均P<0.05)。 5、RT-PCR技术和琼脂糖凝胶电泳实验表明胸腺上皮髓质来源的1C6细胞和皮质来源的4C18细胞中均有KGF受体mRNA表达。 结论： 1、角质细胞生长因子可以促进老龄鼠胸腺细胞生成和增加成熟T细胞向脾脏的输出。 2、角质细胞生长因子可以促进放疗所致小鼠萎缩胸腺的增殖并增加成熟 T细胞向脾脏的输出。 3、角质细胞生长因子可以促进环磷酰胺引起小鼠萎缩胸腺的增殖并增加成熟T细胞向脾脏的输出。 4、角质细胞生长因子可以促进胸腺上皮髓质来源的1C6细胞和皮质来源的4C18细胞的增殖，并且1C6细胞和4C18细胞中有KGF受体mRNA表达。这为我们下一步寻找角质细胞生长因子促胸腺增殖的机制和信号途径提供了前期基础。