Wnt3、Wnt3a对肝前体细胞凋亡的影响

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目的利用腺病毒Wnt3、 Wnt3a转染肝前体细胞,通过Annexin-PE/7-ADD标记的流式细胞方法和Hoechst33342染色检测细胞凋亡状况,Real-time PCR和Western blot检测细胞的凋亡与抗凋亡因子的表达。了解过表达Wnt3、Wnt3a对肝前体细胞凋亡的影响。研究方法转染Wnt3、Wnt3a基因的肝前体细胞,检测Wnt3、Wnt3a基因表达:①Real-time Quantitative PCR法检测Wnt3、Wnt3a的mRNA表达;②Western Blotting法检测Wnt3、Wnt3a蛋白水平表达。Wnt3、Wnt3a对肝前体细胞凋亡的作用:①Real-time PCR和immunobiotting test检测Bcl-2、Bax等凋亡基因核酸和蛋白的表达水平;②Flow Cytometry法检测细胞凋亡率;③Hoechst33342染色,观察细胞凋亡率。结果含有Wnt3、Wnt3a基因的腺病毒成功的转染了肝前体细胞。转染后的肝前体细胞,Hoechst33342染色结果显示细胞核呈现固缩的凋亡特征性改变数量减少;Flow Cytometry结果显示细胞凋亡率降低;Real-time PCR和immunobiotting test结果显示Bcl-2等抗凋亡基因在mRNA和蛋白呈高表达,促凋亡因子Bax的表达减少。结论本研究表明,在肝前体细胞中,过表达的Wnt3、Wnt3a基因能抑制凋亡,其机制可能是通过Bcl-2家族起作用。
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