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放射治疗是乳腺癌治疗的重要手段之一,它不仅明显提高了局部肿瘤控制率,而且提高了患者的远期生存率。但是由于一部分乳腺癌细胞具有辐射抗性,限制了放射治疗的疗效,从而导致肿瘤局部复发和转移。Hippo通路在果蝇和哺乳动物中对器宫的大小和肿瘤的生长发挥关键作用。该通路的下游效应因子是YAP(Yes-associated protein,果蝇中的同源物是Yki),其作为辅激活因子,与转录因子TEADs结合调控Hippo通路下游靶基因的表达,从而影响肿瘤细胞的增殖、分化,肿瘤大小及预后。本研究重点深入系统研究了Hippo-YAP信号通路降低乳腺癌细胞辐射敏感性的作用及其分子机制。主要结果和发现如下：第一部分：YAP蛋白对乳腺癌细胞放射增敏作用为了探讨YAP对乳腺癌细胞MDA-MB-231转移和放射敏感性的影响,利用pCMV-YAP,si-RNA转染法将YAP pCMV质粒和RNA干扰片段转入MDA-MB-231细胞,Western blot法检测YAP、BCL-2蛋白表达水平,transwell法和细胞划痕法检测细胞转移能力,集落形成法检测细胞存活分数。结果表明,成功构建了YAP低表达的MDA-MB-231细胞株；YAP低表达明显抑制细胞的转移；细胞受Y线照射后,YAP低表达使细胞放射敏感性增强,凋亡细胞比例增多,同时BCL-2表达明显降低。提示YAP低表达可明显抑制细胞转移；YAP低表达使细胞辐射敏感性增加很可能与下调BCL-2蛋白水平,促进凋亡有关。第二部分：电离辐射对乳腺癌细胞YAP蛋白及其磷酸化蛋白的影响乳腺癌细胞MCF-7, MDA-MB-231细胞系作为研究对象。两组细胞经过2、4、6、8和10 Gy剂量γ射线照射后,细胞活力均有下降。两组细胞相比较,MCF-7细胞比MDA-MB-231细胞活力下降的幅度更大,故MCF-7对电离辐射更敏感；两组细胞在0、2、4、6Gy照射24h后,YAP蛋白表达含量变化不明显,但是磷酸化的YAP (p-YAP)蛋白在照射剂量>4 Gy时有不同程度的升高。给予两组细胞6Gy照射16h在通过Western Blot实验可以看出p-YAP开始出现明显的升高。由上述实验我们可知,乳腺癌细胞照射后,总YAP并无明显变化,但p-YAP在核内明显增高。