苣荬菜叶中酚类化合物的提取纯化工艺及生物活性研究

来源 :东北林业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:gengjie_1986
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本实验建立了简便、高效的苣荬菜叶中总酚的提取方法,用乙醇对苣荬菜叶进行负压空化辅助提取,并通过大孔吸附树脂对提取物进行分离纯化,同时将得到的纯化物进行抗氧化、抗炎和抑菌作用的测定。主要研究结果如下:1.建立了 HPLC同时分析检测苣荬菜叶中的绿原酸、菊苣酸及木犀草苷的液相方法为:色谱柱:Diamonsil C18 column;流动相:0.3%磷酸水溶液(A)-甲醇(B);柱温30℃;检测波长330nm;流速为1 mL/min;进样量10μL;梯度洗脱条件:0~15min,10%~25%B;15~35min,25%~35%B;35~50min,40%B;流速:1.0mL/min。2.对乙醇负压空化辅助提取苣荬菜叶中总酚条件进行了实验设计以及工艺参数的优化,确定的最优提取工艺参数:提取溶剂:乙醇乙醇浓度:50%提取时间:15 min液固比:30:1 mL/g负压值:-0.08 MPa在上述优化的工艺参数下对苣荬菜叶进行提取,总酚的平均提取率为102.1 mg/g。3.通过实验的研究,确定了大孔吸附树脂富集纯化的最佳工艺方法,从最终的结果上来看,AB-8型大孔吸附树脂是富集纯化苣荬菜叶总酚最优的树脂。且对总酚的纯化条件进行了优化,优化了上样浓度、上样速率、乙醇浓度和乙醇洗脱速率四个条件,得到最佳的纯化苣荬菜叶酚类化合物的实验方法。按照以上最佳的大孔吸附树脂纯化条件操作,得到苣荬菜叶中总酚的纯度比纯化前提高了 3.75倍。4.对三种提取方法得到的多酚纯化物进行抗氧化、抗炎活性及抑菌活性实验研究。DPPH自由基清除率为:VC对照品的清除能力要显著高于其他三组实验效果,ethanol-NPCE的清除能力要大于ethanol-UAE和ethanol-MAE的自由基清除能力,四个实验组的 IC50值分别为:0.0628、0.252、0.314、0.321 mg/mL。FRAP 还原能力:Vc 对照品的还原能力最强,接下来是ethanol-NPCE和ethanol-UAE,效果最差的是ethanol-MAE。清除 ABTS+能力为:Vc>ethanol-NPCE>ethanol-UAE>ethanol-MAE。抗炎活性实验主要是通过MTT法,对三种提取方法得到的苣荬菜叶酚类化合物进行细胞活力测定,研究发现苣荬菜叶酚类化合物的浓度在12.5~200μg/mL的范围内,对RAW264.7细胞活力没有产生影响,因此,可以说明苣荬菜叶酚类化合物在这个浓度范围内没有对细胞产生毒性危害。但是当酚类化合物的浓度达到200μg/mL时均表现出对抑制NO分泌效果,结果相比较而言,ethanol-NPCE得到的提取物表现出的抑制NO分泌效果要好于其他两种提取方法。抑菌活性实验主要测定了苣荬菜叶酚类化合物对5种供试菌的抑菌圈大小和最小抑菌浓度,实验结果表明,当酚类化合物的浓度达到250 mg/mL时对枯草芽杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌和大肠杆菌的抑菌圈直径分别达到了 15.62 mm、15.01 mm、14.48 mm、12.31 mm、10.66 mm,最小抑菌浓度分别为 95 mg/mL、110 mg/mL、120 mg/mL、130 mg/mL和145 mg/mL,从实验数据分析来看,宦荬菜叶酚类化合物具有一定的抑菌活性。
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