【摘 要】
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该文首先采用5-RACE的方法克隆到了MUM基因全长并用原核表达的方法,构建了原核表达载体PGEX4T-3-MUM,获得了纯化的融合蛋白GST-MUM.将纯化的GST-MUM分别免疫昆明鼠和Balb/c鼠
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该文首先采用5-RACE的方法克隆到了MUM基因全长并用原核表达的方法,构建了原核表达载体PGEX4T-3-MUM,获得了纯化的融合蛋白GST-MUM.将纯化的GST-MUM分别免疫昆明鼠和Balb/c鼠以制备多克隆抗血清及单克隆抗体.应用杂交瘤技术,筛选出4株单克隆抗体.应用酶联免疫吸附(ELISA)和Westhern blot实验鉴定抗体的特异性,选出了一株效价及特异性好被命名为1G11的抗体.应用免疫组织化学及Westhern blot技术,将Latexin蛋白定位于胞浆区并检测了MUM基因在多种肿瘤细胞系及组织中蛋白质表达的水平.用RT-PCR及Northern blot技术检测了MUM基因在多种肿瘤细胞系中RNA表达的水平.该研究还采用反义RNA技术,将MUM基因cDNA全长756个碱基作为反义序列正向和反向插入PLXSN的腺病毒载体,通过转染有内源性MUM表达的BGC-823细胞,成功地筛选到可以稳定表达外源性MUM正义和反义RNA的细胞系.经PCR方法证实有外源性MUM的存在和表达.并用克隆形成实验证明外源基因对细胞生长的影响.
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