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第一部分表皮生长因子受体信号通路抑制剂吉非替尼对大鼠骨折愈合的影响目的:建立骨折模型,观察表皮生长因子受体(EGFR)信号通路抑制剂吉非替尼对大鼠股骨骨折愈合的影响。方法:选择50只雄性4周龄SD大鼠,建立股骨骨折模型,采用随机数字表法随机分为2两:实验组予以表皮生长因子受体信号通路抑制剂吉非替尼(100mg·Kg-1·d-1),对照组予以等剂量的甲基纤维素;术后7、14、21、28、42d行X线检查并获股骨标本,大体观察股骨骨折愈合情况;运用Lane and Sandhu X线评分评价骨愈合情况,Image J软件测量骨痂直径大小;行microCT检测检测观察组织形态并测量BV(骨体积)、BV/TV(骨体积分数)、Tb.N(骨小梁数量)、Tb.Th(骨小梁厚度)、TB.Sp(骨小梁间隔)、BS(骨表面积)、BS/BV(骨表面积和骨体积比值)、BMD(骨密度);生物力学检测股骨标本的刚度、最大载荷及破坏能量,比较两组骨折愈合的差异。结果:骨折后第7d、14d、21dX线评分实验组均优于对照组(P<0.05),骨痂最大直径小于对照组(P<0.05),第28d、42d两组无明显差异;microCT检测显示实验组 BV 骨折后第 14d(59.30±6.54mm3)、21d(43.08±2.33mm3)高于对照组第 14d(42.39±7.82mm3)、21d(33.43±5.94mm3),BV/TV 第 14d、21d、28d(0.61±0.06%、0.55±0.05%、0.53±0.04%)高于对照组(0.48±0.07%、0.44±0.07%、0.43±0.03%),Tb.N第14d、21d、28d(2.05±0.111/mm、1.86±0.181/mm、2.034±0.261/mm)高于对照组(1.63±0.211/mm、1.32±0.211/mm、1.65±0.081/mm),Tb.Th 第 14d、21d、28d(0.33±0.02mm、0.33±0.03mm、0.27±0.02mm)高于对照组(0.27±0.03mm、0.28±0.02mm、0.23±0.01mm),TB.Sp 第 21d(0.39±0.07mm)高于对照组(0.30±0.03mm);实验组 BS/BV 在 14d、21d、28d时(9.3 9±1.66mm-1、10.15±1.14mm-1、7.99±0.81mm-1)较对照组(6.51±1.42mm-1、7.33±1.31mm-1、6.24±0.79mm-1)增高;实验组BMD在第42d(723±7.4mgHA/ccm)高于对照组(686±21.6mgHA/ccm)。生物力学检测示骨折后21d实验组最大载荷(38.65±1.07N)、刚度(9898±1733N/mm)优于对照组(29.47±1.00N、5492±940N/mm),28d时实验组最大载荷(63.63±7.74)大于对照组(45.42±3.26N),42d时实验组破坏能量(60.20±4.34Nmm)大于对照组(37.35±12.81Nmm)。结论:表皮生长因子受体(EGFR)信号通路抑制剂吉非替尼对骨折愈合具有影响,可促进骨折愈合。第二部分表皮生长因子受体信号通路抑制剂吉非替尼影响骨折愈合机制的初步研究目的:在第一部分研究的基础上,探讨表皮生长因子受体信号通路抑制剂吉非替尼促进骨折愈合的初步机制方法:选择62只雄性4周龄SD大鼠,建立股骨骨折模型,采用随机数字表法随机分为2组:实验组予以表皮生长因子受体信号通路抑制剂吉非替尼(100mg Kg-1·d-1),对照组予以等剂量的甲基纤维素;术后第7、14、21、28、42d收集血清、骨痂组织及股骨以待检测。行HE、番红固绿染色观察骨痂组织形态及软骨生成;免疫组织化学检测Ki-67+,观察骨痂组织中细胞增殖情况;硬组织切片动态观察骨痂新骨生成情况;ELISA检测血清成骨标记物(BALP和PINP)及破骨标记物(TRACP-5b和CTX),实时荧光定量PCR检测骨痂中相关骨转换标记物 BALP、COL1a1、COL10、COL2a1、Osteocalcin、TRAP 的mRNA表达,同时采用Masson染色对骨痴组织中的胶原蛋白进行组织学观察,比较两组骨折愈合的差异。结果:骨折端HE及番红固绿染色显示,第7d、14d、21d实验组骨痂组织特别是软骨痂大于对照组,实验组骨折愈合进程较对照组大鼠快;实验组Ki67+增殖细胞数在7d、14 d、21d增高。硬组织切片动态观察实验组新生骨组织生成比对照组更多。血清ELISA检测示,实验组血清BALP水平在第14、21d(2.57±0.14 ng/mL、3.47±0.26 ng/mL)高于对照组(2.07±0.19ng/mL、2.77±0.29ng/mL(P<0.05),实验组PINP 在第 7d、14d、21d(2216.50±96.68pg/mL、2692.33± 136.76pg/mL、3196.75±221.90 pg/mL)分别高于对照组(1969.50±89.34pg/mL、2241.33± 107.86 pg/mL、2603.25±361.60pg/mL),在第7dTRACP5b(11.58±0.47 ng/mL)、CTX(8.02±0.40ng/mL)水平分别高于对照组(10.33±0.53ng/mL、7.11±0.36ng/mL)(P<0.05)。实时荧光定量 PCR 检测示:BALP mRNA的表达在14d时较对照组增高,COL1a1 mRNA的表达在7d、14d时较对照组增高,COL2a1mRNA的表达在14d、21d时较对照组增高,COL10 mRNA的表达在7d、14d、21d时较对照组增高,Osteocalcin mRNA的表达在14d时较对照组增高,TRAPmRNA表达在7d较对照组增高,21d较对照组降低(P<0.05)。Masson染色显示实验组第7d、14d、21d基质中胶原纤维量更多。结论:表皮生长因子受体(EGFR)信号通路抑制剂吉非替尼促进了骨痂组织中软骨细胞、成骨细胞的分化成熟,促进了骨痴形成,对骨折愈合中的骨形成影响明显。吉非替尼促进了骨折后骨折端早期破骨细胞聚集,出促进骨折端骨碎片及坏死物质吸收。