拟南芥中独脚金内酯诱导降解系统SMAX1-likes-Venus的构建

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独脚金内酯(Strigolactones,SLs)是一类与植物分枝相关的新型植物激素,近年来对SLs的生物合成和信号转导已经取得了较大的进展,但在其原位实时监测方法进展缓慢。本文根据用生物信息学的方法在拟南芥中找到水稻D53的同源基因SMAX1-likes基因,克隆得到SMAX1-likes家族基因,与VENUS进行融合,转入拟南芥中,为建立SL的检测方法奠定了基础。主要研究结果如下:1.生物信息学分析得到OsD53在拟南芥中的同源基因SMAXL6、SMAXL7、SMAXL8,克隆并构建得到SMAXL6-VENUS、SMAXL7-VENUS、SMAXL8-VENUS融合表达载体。2.通过SMAXL7与D53的空间结构分析,结果表明它们的空间结构非常相似,SMAXL7可能在拟南芥中是SL信号下游的转录抑制因子。将SMAXL7划分为结构域M、D1、N、D2,分别克隆各结构域,构建M-SMAXL7、D1-SMAXL7、N-SMAXL7、D2-SMAXL7与VENUS融合表达载体。3.在拟南芥原生质体中瞬时表达SMAXL7-VENUS,荧光显微镜观察证明SMAXL7能在拟南芥细胞的细胞核中很好地表达。为了得到稳定遗传的拟南芥转基因株系,将M-SMAXL7-VENUS、D1-SMAXL7-VENUS、N-SMAXL7-VENUS、D2-SMAXL7-VENUS、SMAXL7-VENUS转入农杆菌中,转化到拟南芥野生型(Col-0)中,筛选得到各个稳定表达的转基因株系。4.构建M-SMAXL7、D1-SMAXL7、N-SMAXL7、D2-SMAXL7原核表达载体,在体外诱导表达M-SMAXL7、D1-SMAXL7、N-SMAXL7、D2-SMAXL7蛋白,为后续SLs的深入研究奠定了基础。
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