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目的: 目前的研究已经证实miRNA186在包括非小细胞肺癌、膀胱癌、胰腺导管癌等肿瘤中起着重要的调控作用,但是miRNA186与前列腺癌之间的关系目前还没有研究。本研究的目的主要是探究miRNA186对前列腺癌细胞生物学功能的影响,寻找miRNA186在前列腺癌细胞中作用的下游靶基因,探究其作用的机制。 方法: 首先通过荧光定量PCR的方法检测miRNA186在前列腺上皮细胞和3种不同前列腺癌细胞之间的表达情况,然后构建高表达miRNA186的重组质粒载体,通慢病毒转染和筛选获得稳定高表达miRNA186的前列腺癌细胞,荧光定量PCR检测其表达情况。通过体外的CCK8实验和流式细胞仪检测细胞周期实验来验证过表达miRNA186对前列腺癌细胞生物功能的影响,体内实验通过裸鼠肿瘤瘤球形成实验来验证过表达miRNA186对前列腺癌细胞成瘤能力的影响。在寻找靶基因实验中,结合数据库(Targetscan,miRanda,mirwalk,and Pictar)的预测结果,挑选10个可能的靶基因,首先通过荧光定量PCR检测这10个靶基因在过表达miRNA186的前列腺癌细胞和对照组细胞中的表达情况,挑选其中明显受到过表达miRNA186影响的靶基因,进行荧光素酶报告基因实验验证和Western Blot验证,寻找出miRNA186在前列腺癌中的靶基因。 结果: 1)荧光定量PCR结果显示miRNA186在前列腺癌细胞中明显地表达,在PC-3细胞中表达量最低。 2)CCK8实验表明过表达miRNA186能够明显抑制细胞的增值能力,通过流式细胞仪检测细胞周期后发现,过表达miRNA186的前列腺癌细胞PC-3中,G1期细胞数目明显变多,细胞分裂变慢。裸鼠肿瘤瘤球形成实验结果表明,过表达miRNA186能够明显抑制前列腺癌细胞PC-3的肿瘤瘤球的形成。 3)荧光定量PCR结果表明,在过表达miRNA186的前列腺癌细胞PC-3中,YY1,CDK6,MAP3K2和VEGFA基因的表达受到明显了抑制,通过荧光素酶报告基因实验结果发现,过表达miRNA186能够明显抑制YY1和CDK6基因的荧光素酶活性,最后的Western Blot实验结果表明,YY1和CDK6在过表达miRNA186的前列腺癌细胞中,蛋白表达明显受到抑制。 结论: MiRNA186在前列腺癌细胞中低表达,过表达miRNA186能够明显抑制前列腺癌细胞的增殖能力和肿瘤瘤球的形成,其作用的机制是通过直接与YY1和CDK6基因信使RNA的3UTR区结合,干扰YY1和CDK6表达,抑制前列腺癌的发生与发展。通过以上研究结果,也为临床上前列腺癌的诊断和治疗提供了一个新的靶点。