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目的:关于白介素6（IL-6）在增加心律失常风险中的作用仍然知之甚少,阐述IL-6加重蟾酥注射液对正常豚鼠致心律失常的机理研究,提升临床用药的安全性,为心脏安全性评价提供理论基础。药品:蟾酥注射液:购于泰州市中西医结合医院,规格2mL/支,批准文号:国药准字Z32020693;重组人 IL-6:购于 Pepro TECH（USA,catalog number 200-06）。方法:1.豚鼠在体心电图分析豚鼠腹腔注射乌拉坦进行麻醉,以仰卧姿势将其手足四肢固定于操作台面上,分离出豚鼠一侧的颈静脉,使用静脉输液针对其进行插管并给药。针形电极扎入豚鼠四肢皮下,记录Ⅱ导联心电信号,通过四道生理记录仪采集并记录存入计算机硬盘。静脉推注药物五分钟后开始记录心电图,并分析心率HR、PR间期、QRS间期以及QTc间期。2.豚鼠离体心电图分析豚鼠腹腔注射乌拉坦进行麻醉,固定豚鼠后,迅速开胸取出其心脏,采用Langendorff离体心脏灌流装置,经主动脉进行离体心脏灌流实验。心脏复跳后,在心外膜下插入三根银丝电极:正极与负极分别置于心尖与右心房,接地电极置于主动脉根部。待心脏跳动情况稳定后,心电信号经四道生理记录仪采集并记录存入计算机硬盘,分析心率HR、PR间期、QRS间期和QTc间期。3.豚鼠左心室心肌细胞动作电位分析按改良的酶解法分离豚鼠单个心室肌细胞。动物麻醉方法同离体心电图。完全麻醉后取出豚鼠心脏,在0℃的无钙灌流液中清洗修剪,用细线将其固定在Langendorff心脏灌流装置上,在37℃恒温,充氧（O2 95%+CO2 5%）条件下,用无钙灌流液持续逆向灌流,使心脏先恢复跳动后停跳,再用含消化酶（Collage-nase Ⅱ 2 mg/mL）的无钙液灌流液反复灌流40min,至心脏膨大、松弛,最后再用适量KB液灌流冲洗。取下心脏,将左心室肌组织块置于盛有KB液的玻璃皿中充分剪碎,用干净且湿润的纱布进行过滤,将得到的细胞悬液导入离心管中,静置,KB液洗三次,最后置于室温下备用。采用膜片钳全细胞电流钳记录方法,取细胞悬液数滴,加入于显微镜的灌流槽中,待细胞稳定后,用细胞外液进行灌流。待心肌细胞在浴槽中静置后选取体积较大、杆状、无跳动、横纹清晰的心肌细胞进行膜片钳全细胞记录。用微电极拉制仪将玻璃毛细管拉制成尖端直径约1μm的电极,将电极内液充灌进电极,入水阻抗约为2-5MΩ,调节三维操纵器使电极尖端移至细胞表面进行封接。在电压钳模式下记录电阻,当封接电阻达到1GΩ以上迅速补充快电容,并给予负压对细胞破膜。在电流钳模式下记录动作电位,电信号由膜片钳放大器放大,再经数模转换器转换与计算机对接,在电脑屏幕上显示,信号的发放、采集与数据分析均由Clampfit 10.4软件完成,并将数据存储于电脑硬盘,分析 APD90。4.全细胞电压钳记录L型钙通道电流按改良的酶解法分离豚鼠单个心室肌细胞。动物麻醉方法同离体心电图。完全麻醉后取出豚鼠心脏,在0℃的无钙灌流液中清洗修剪,用细线将其固定在Langendorff心脏灌流装置上,在37℃恒温,充氧（O2 95%+CO2 5%）条件下,用无钙灌流液持续逆向灌流,使心脏先恢复跳动后停跳,再用含消化酶（Collage-nase Ⅱ 2 mg/mL）的无钙液灌流液反复灌流40min,至心脏膨大、松弛,最后再用适量KB液灌流冲洗。取下心脏,将左心室肌组织块置于盛有KB液的玻璃皿中充分剪碎,用干净且湿润的纱布进行过滤,将得到的细胞悬液导入离心管中,静置,KB液洗三次,最后置于室温下备用。采用膜片钳全细胞电压钳记录方法,取细胞悬液数滴,加入于显微镜的灌流槽中,待细胞稳定后,用细胞外液进行灌流。要选取横纹清晰,杆状,边缘不卷曲,不收缩,表面光滑,且没有收缩的细胞。刺激程序:钳制电压为-80mV,阶跃到-40mV并维持200ms（使Na+电流失活）,然后施加到OmV的300ms试验电压。5.全细胞电压钳记录Na+电流按改良的酶解法分离豚鼠单个心室肌细胞。动物麻醉方法同离体心电图。完全麻醉后取出豚鼠心脏,在0℃的无钙灌流液中清洗修剪,用细线将其固定在Langendorff心脏灌流装置上,在37℃恒温,充氧（O2 95%+CO2 5%）条件下,用无钙灌流液持续逆向灌流,使心脏先恢复跳动后停跳,再用含消化酶（Collage-nase Ⅱ 2 mg/mL）的无钙液灌流液反复灌流40min,至心脏膨大、松弛,最后再用适量KB液灌流冲洗。取下心脏,将左心室肌组织块置于盛有KB液的玻璃皿中充分剪碎,用干净且湿润的纱布进行过滤,将得到的细胞悬液导入离心管中,静置,KB液洗三次,最后置于室温下备用。采用膜片钳全细胞电压钳记录方法,分离出豚鼠原代左心室肌细胞,取细胞悬液数滴,加入于显微镜的灌流槽中,待细胞稳定贴壁后,用细胞外液进行灌流。刺微程序:在电压钳状态下,以10 mV的阶跃使豚鼠心室肌细胞由-90 mV的保持电压逐步去极化至+60 mV,刺激电压持续60 ms。结果:1.IL-6单用对豚鼠在体心脏心电图的影响IL-6（18.4 μg/kg）单用能够显著延长PR和QTc间期,而对HR和QRS无明显作用。2.IL-6合用蟾酥注射液对豚鼠在体心脏心电图的影响蟾酥注射液 5,10 倍临床剂量（7.5,15 mL/kg）、IL-6（18.4 μg/kg）以及 IL-6（18.4 μg/kg）合用蟾酥注射液1,5,10倍临床剂量（1.5,7.5,15 mL/kg）均显著延长P-R和QTc间期,而对HR,QRS无明显作用。3.IL-6单用对豚鼠离体心脏心电图的影响IL-6（20 μg/L）单用能够显著延长PR和QTc间期,而对HR和QRS无明显作用。4.IL-6合用蟾酥注射液对豚鼠离体心脏心电图的影响蟾酥注射液1,5,10,30倍临床浓度（1.7,8.5,17,51 mL/L）未能显著性影响豚鼠离体心脏,IL-6（20 μg/L）以及IL-6（20 μg/L）合用蟾酥注射液10,30倍临床浓度（17,51 mL/L）显著延长PR和QTc间期,而对HR和QRS无明显作用。5.IL-6单用对豚鼠单个心室肌细胞动作电位的影响IL-6（20μg/L）单用能够显著延长APD90。6.IL-6合用蟾酥注射液对豚鼠单个心室肌细胞动作电位的影响蟾酥注射液5,10倍临床浓度（8.5,17 mL/L）、IL-6（20 μg/L）以及IL-6（20μg/L）合用蟾酥注射液1,5,10倍临床剂量（1.7,8.5,17 mL/L）均显著延长APD90。7.IL-6单用对豚鼠左心室肌细胞L型钙电流的影响IL-6（20 μg/L）单用能够显著显著抑制L-型钙电流。8.IL-6合用蟾酥注射液对豚鼠左心室肌细胞L型钙电流的影响蟾酥注射液5,10倍临床浓度（8.5,17 mL/L）以及IL-6（20 μg/L）合用蟾酥注射液1,5,10倍临床剂量（1.7,8.5,17 mL/L）均显著抑制L型钙电流。9.IL-6单用对豚鼠左心室肌细胞Na+电流的影响IL-6（20 μg/L）单用未能显著性影响钠电流。10.IL-6合用蟾酥注射液对豚鼠Na+电流的影响蟾酥注射液 1,5,10 倍临床浓度（1.7,8.5,17 mL/L）、IL-6（20 μg/L）以及 IL-6（20 μg/L）合用蟾酥注射液1,5,10倍临床浓度（1.7,8.5,17 mL/L）均未能显著性影响钠电流。结论:1.豚鼠的在体心电图和离体心脏心电图实验表明IL-6会加重蟾酥注射液诱发心律失常的概率。2.心肌细胞动作电位实验表明,IL-6促使蟾酥注射液明显延长APD90,降低动作电位幅值,进一步验证了 IL-6加重蟾酥注射液导致心律失常的作用。3.膜片钳离子通道实验的结果表明,IL-6加重蟾酥注射液不同程度抑制L型钙通道,但对钠通道抑制不明显,揭示IL-6能诱导蟾酥注射液使得正常豚鼠发生房室传导阻滞和心室内传导阻滞。