肺癌是所有癌症相关死亡的主要原因之一。事实上,单独的肺癌死亡超过了接下来三种最普遍的癌症死亡(结肠癌,乳腺癌和前列腺癌)的总和。肺癌的预后不良部分是由于在早期疾病进展期间缺乏任何明显症状的晚期诊断。此外,在NSCLC中鉴定的包括突变,扩增,缺失和融合在内的多种基因改变加重了信号通路和生理活性的异常。因此,探究治疗肺癌的有效靶点迫在眉睫。近几十年的研究表明有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径转导许多不同的信号,从而产生了广泛的细胞反应,包括细胞增殖,分化,存活,迁移,神经元功能和免疫应答。Raf激酶(Rapidly Accelerated Fibrosarcoma)是逆转录病毒致癌基因,它调控细胞的分化、转化、生长和凋亡等诸多生命过程,Raf-MEK-ERK通路是细胞信号传导的一条主干通路,这条通路的异常调控是细胞癌变的主要原因之一。RAF激酶的生理调节是复杂的,并涉及几个步骤,包括蛋白质与蛋白质之间的相互作用,磷酸化,去磷酸化和构象变化。且C-RAF作为MAPK通路中的主要枢纽蛋白,其功能及结合蛋白对肺癌的发生发展具有重要作用。KAP1是人源TRIM基因家族的成员,并且与其它三种TRIM蛋白(TIF1α,TIF1γ和TIF1δ)高度相关。KAP1是正常发育和分化的关键调节物;缺乏KAP1的小鼠在预处理前死亡,而在成年前脑中特异性缺失KAP1的小鼠表现出更高水平的焦虑和应激诱导的学习及记忆的改变。KAP1还参与维持多能性,是小鼠胚胎干细胞的终末分化所必需的,并且已经与促进和抑制不同成人细胞类型的分化相关。KAP1在正常和肿瘤细胞的增殖和分化中起关键作用。本研究发现C-RAF可以特意结合KAP1;实验检测了临床肺癌组织及邻近正常肺组织中KAP1的表达水平,实验发现KAP1在肺癌组织中高表达。在细胞实验中,利用CRISP/cas9技术成功的在肺癌A549细胞株中成功敲除KAP1,并进行了 rescue实验。实验发现敲除KAP1后,细胞增殖率显著降低;在化疗药物敏感中发现敲除KAP1后A549细胞对顺铂及5-氟尿嘧啶(5-FU)的敏感性显著增加,且发现低浓度的5-FU基本不会促进A549细胞的凋亡,敲除KAP1后细胞明显发生凋亡;通过western blot实验检测野生A549细胞、rescue细胞及敲除KAP1细胞确定了敲除KAP1后,ERK会被异常激活;划痕及transwell实验发现敲除KAP1后细胞迁移受到显著抑制;成球实验发现敲除KAP1成球率显著降低,且western blot显示细胞干性标志物明显降低;软琼脂克隆形成发现敲除KAP1后克隆形成数目及大小显著减少;血管形成发现敲降KAP1后,血管形成能力显著下降;EMT转化实验发现敲除KAP1后,细胞转化能力明显减弱;流失细胞术显示细胞周期受到显著抑制;移植瘤实验表明敲除KAP1后裸鼠移植瘤的体积及重量明显减小;裸鼠体重明显增加;AKO组移植瘤的增殖速度明显慢于A549组。移植瘤HE染色显示:A549组较AKO组相比,肿瘤细胞形态不规则,胞核肥大、呈蓝色深染、核分裂相多见,偶见腺腔样结构。本研究表明KAP1在肺癌细胞A549中具有重要作用,敲除后细胞增殖生长、细胞干性、侵袭迁移能力、血管形成能力及细胞周期受到抑制,且会异常磷酸化ERK,提高A549细胞对5-FU的敏感性。目前对于C-RAF及KAP1在肺癌发生发展的作用还很少,本研究对于它们在肺癌发病机制中的作用进行了初步探索,为临床治疗肺癌提供理论依据和新的作用靶点。