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防御素(Defensin)是广泛存在于动物和植物体内的一类抗菌活性肽，是抗菌肽中较为重要的一种，主要来源于上皮组织，是正常机体抵抗外界病原微生物入侵的第一道防线。它们分子质量小，富含正电荷，作用于细胞膜，具有广谱高效的杀菌活性，能有效杀灭革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、某些真菌、螺旋体、被膜病毒等微生物。由于其独特的作用机制，几乎无耐药性。
猪β防御素—1(pBD—1)在猪的先天性免疫应答保护中起到很大的作用。根据猪β防御素—1的氨基酸序列、毕赤酵母偏嗜密码子改造核苷酸序列以及根据该基因的酶切图谱和表达载体多克隆位点的分析，在上游基因中加入了限制性内切酶EcoRⅠ，在下游基因中加入了限制性内切酶KpnⅠ，加入了基因序列的终止密码子。pMD-PBD—1与表达载体pPICZαC分别经过EcoRⅠ和KpnⅠ双酶切，然后连接转化大肠杆菌，得到重组表达质粒pPICZαC-PBD—1，送公司测序鉴定。结果显示目的基因完整ORF已经正确插入表达载体pPICZαC中。
重组表达质粒pPICZαC-PBD—1经SacⅠ单酶切电泳后，纯化回收，电击转化感受态的毕赤酵母工程菌X—33，涂布YPDS+ZeocinTM选择性培养基，置28℃温箱培养4～5天，结果获得多个单菌落。通过提高抗生素浓度，筛选出具高抗性的转化子。进行诱导表达，每24h添加一次甲醇，保持终浓度为1.0％。诱导表达3天后，收集菌液，离心，取上清。取少量上清液进行SDS-PAGE电泳分析，可见一条分子量约4.5KDa的清晰蛋白条带。
经抑菌试验表明所分泌的重组pBD—1具有抗革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的生物活性。经测定目的蛋白含量约为66.23％，约为48.65mg/L，猪防御素—1的最低抑菌浓度约为7.99μg/mL。
本研究成功地构建了重组酵母表达质粒pPICZαC-PBD—1，并在毕赤酵母中对猪防御素—1实现了正确表达，表达的重组蛋白对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌具有较好的抑菌效果。