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目的:利用反义技术分别封闭Survivin基因和VEGF因子在骨肉瘤细胞中的表达,分析两者在骨肿瘤细胞增殖和血管生成中的作用并探讨两者的相互关系,为研究骨肿瘤的发生、发展和转移提供理论依据。同时,靶向调节Survivin基因和VEGF因子可能为骨肉瘤的治疗提供理论基础。方法:培养骨肉瘤细胞(9607细胞系),分为实验组和对照组。分别采用脂质体介导Survivin基因反义寡核苷酸(Survivin antisense oligonucleotide , Survivin-ASODN )和VEGF因子反义寡核苷酸(VEGF-ASODN)转染骨肉瘤细胞,以空脂质体处理对照组细胞。采用MTT法检测各组细胞的增殖抑制率,RT-PCR法检测各组细胞中Survivin和VEGF mRNA的表达,免疫组织化学S-P法检测各组细胞Survivin和VEGF的蛋白表达。结果:(1)经同浓度Survivin-ASODN和VEGF-ASODN处理的9607细胞,在所测定时间点内(24、48、72小时)所测得各组细胞抑制率Survivin-ASODN组分别为(31.400±0.691)%、(52.515±0.870)%、(78.473±1.025)%。VEGF-ASODN组分别为(28.511±0.825)%、(49.292±0.900)%、(71.349±1.223)%两者均较对照组明显升高(P<0.05)。(2)RT-PCR检测各组细胞mRNA表达,经过Quantity One图像分析。在Survivin-ASODN组和VEGF-ASODN组Survivin mRNA相对表达量分别为(1.5198±0.084)和(1.6261±0.091),均低于对照组(1.9610±0.094),有显著性差异(P<0.05);VEGF mRNA的相对表达量分别为(1.7489±0.065)和(1.5429±0.064)较对照组(2.0453±0.082)降低,有显著性差异(P<0.05)。在Survivin-ASODN组中Survivin mRNA和VEGF mRNA表达量均降低,而且在VEGF-ASODN组中VEGF mRNA和Survivin mRNA表达量也都降低。经相关分析Survivin-ASODN组Survivin mRNA与VEGF mRNA表达量抑制率的相关系数r=0.602(p=0.038);VEGF-ASODN组中VEGF mRNA与Survivin mRNA表达量的抑制率相关系数r=0.702,(p=0.011)两者呈正相关。(3)镜下观察,空脂质体组细胞形态基本正常,贴壁性良好,生长旺盛;免疫细胞化学镜下,棕色阳性颗粒主要见于细胞胞浆内,弥漫分布,胞核内少见阳性染色;ASODN组细胞体积渐小,形态不整或鼓泡,一些细胞变圆、皱缩,脱壁悬浮细胞增多,细胞生长缓慢;免疫细胞化学镜下,胞浆内阳性染色消失或变弱。(4)经免疫组化评分细胞蛋白表达强弱分析,表明ASODN组细胞中Survivin蛋白和VEGF蛋白的表达量均较对照组的蛋白表达量下降,有显著性差异,(P<0.05)。结论:(1)Survivin基因和VEGF因子在骨肉瘤细胞中均有表达。(2)反义技术能够特异地封闭靶基因,有效抑制肿瘤细胞的生长,且封闭效果有明显的时间依赖性,Survivin-ASODN和VEGF-ASODN转染骨肉瘤细胞后,瘤细胞均出现抑制。(3)Survivin基因下调的同时出现了VEGF因子的下调。并且在VEGF因子下调的同时出现Survivin基因下调。提示Survivin基因和VEGF因子两者在细胞内部相互存在某种调节机制,当一种基因受到抑制表达下调后另一种基因的表达也会顺之下调。进一步探讨两者的相互影响和调控机制可以为研究骨肿瘤细胞生长,血管增生提供理论依据。