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目的:通过对食管鳞癌组织中CyclinD1、NF-κBp65和β-catenin基因及蛋白表达的检测,探讨CyclinD1、NF—KBp65和β-catenin在食管癌的发生、发展及浸润、转移过程中的作用以及它们之间的相关性,为临床食管癌诊疗与判断预后提供有价值的参考指标。
方法:
1.应用逆转录聚合酶链反应方法检测80例食管鳞状细胞癌、癌旁、正常食管粘膜中CyclinD1 mRNA的表达水平。
2.应用流式细胞术方法检测40例食管鳞状细胞癌、30例不典型增生组织和20例正常食管粘膜中β-catenin蛋白含量,其中蛋白的表达量用平均荧光强度(均道值)来表示。
3.应用免疫组织化学S-P法检测59例食管鳞状细胞癌、25例不典型增生组织和15例正常食管粘膜中NF-κBp65的蛋白表达。
4.应用免疫组织化学SP法检测72例食管鳞状细胞癌、40例不典型增生组织和40例正常食管粘膜中β-catenin蛋白的表达。
结果:
1.RT-PCR方法检测CyclinD1在不同食管组织中的表达应用RT-PCR方法检测80例食管鳞状细胞癌、不典型增生组织和正常粘膜中CyclinD1 mRNA的表达,结果显示:CyclinD1在癌组织中的表达显著高于不典型增生组织和正常粘膜(P均<0.05),CyclinD1的表达与患者的性别、年龄无关(P均>0.05),而与细胞分化程度(P<0.05)、浸润深度(P<0.05)、淋巴结转移有关(P<0.01)。
2.FCM方法检测β-catenin蛋白在不同食管组织中的表达应用FCM技术对40例食管鳞状细胞癌、30例不典型增生组织和20例正常粘膜中β-catenin蛋白表达量(平均荧光强度、均道值)的检测结果显示:癌组织中β-catenin蛋白表达量(558.14±57.60)显著低于不典型增生组织(665.61±73.38)和正常粘膜(732.64±65.60)(P<0.01)。且β-catenin蛋白含量与细胞分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05),而与与浸润深度和患者的性别、年龄无关(P>0.05)。
3.NF-κBP65在不同食管组织中的表达59例食管鳞状细胞癌、25例食管不典型增生组织和15例正常食管粘膜中NF-κBp65蛋白的表达,结果显示NF-κBP65在癌组织的阳性表达率(61.0％)明显高于非典型增生组织(20％)和正常粘膜(13.3％),癌组织的阳性表达率与非典型增生组织和正常粘膜的阳性表达率之间有显著性差别(P<0.01)。在9例中度非典型增生组织的阳性表达3例(33.3％),在16例轻度非典型增生组织的阳性表达2例(12.5％),在15例正常粘膜中阳性表达1例(13.3％),非典型增生组织的阳性表达和正常粘膜中阳性表达之间呈逐渐增高趋势但他们之间的差别无显著性(P>0.05),可能与标本例数少或取材有关。NF-κBP65在胞浆中的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、细胞分化程度、浸润深度和淋巴结转移均无关。NF—KBP65在胞核中的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、细胞分化程度无关(P>0.05),但与淋巴结转移及浸润深度有关(P<0.05)。
4.IHC法检测β-catenin在不同食管组织中的表达72例食管鳞状细胞癌、40例食管不典型增生组织和正常粘膜中β-catenin蛋白的表达,结果显示:β-catenin在癌组织中的异常表达率(61.1％)明显高于不典型增生组织(27.5％)和正常粘膜(7.5％)(P<0.01),并随组织类型不同有升高的趋势。β-catenin的表达与患者的性别、年龄、浸润深度无关(P>0.05),但与细胞分化程度(P<0.05)、淋巴结转移有关(P<0.01)。
结论:
1.食管鳞状细胞癌中CyclinD1 mRNA的表达水平显著高于食管不典型增生组织和食管正常粘膜,提示细胞中cyclinD1的异常表达可能参与了食管癌的发生与发展；CyclinD1 mRNA表达水平与癌细胞浸润深度、细胞分化程度和有无淋巴结转移有关,与性别和年龄无关,提示CyclinD1可能参与调节食管癌的恶性度转化,并参与了食管癌的浸润与转移。
2.NF—KBP65在食管鳞状细胞癌中的表达明显高于食管非典型增生组织和正常粘膜,提示NF—KBP65表达可能参与食管癌的发生,NF-κBP65胞核过表达与侵润程度和淋巴结转移相关,NF-κBP65胞浆过表达与侵润程度和淋巴结转移无关,提示可能NF-κBP65非活化形式是在细胞胞浆中表达,而胞核表达是其活化形式,通过活化(胞核表达)发挥重要的生物学作用,即促进食管癌浸润转移。
3.食管鳞状细胞癌中的β-catenin蛋白异常表达(在细胞浆中表达)水平明显高于食管不典型增生组织和食管正常粘膜,提示β—catenin蛋白在细胞浆中的异常表达水平增多可能参与食管癌的发生与发展；β-catenin蛋白在细胞浆中的异常表达水平与细胞分化程度、有无淋巴结转移有关,提示β-catenin蛋白细胞浆中异常表达参与了食管癌的浸润与转移以及细胞恶性度的转化。