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瞳孔对光反射（pupillary light reflex，PLR）与视觉系统、丘脑、脑干系统及自主神经系统有着密切的关系[1]，其在视觉系统[2-5]、神经系统[6,7]及精神心理相关疾病[8,9]的诊断和评价中有着重要意义。临床上通常采用光照法直接观察瞳孔口径及其变化，简单、实用，但是影像学方法能够客观记录瞳孔的细节变化和动态变化，因此后者被广泛用于研究工作。为进一步探索PLR指标在视觉生理和眼科临床研究中的应用，本文建立了小鼠PLR影像学检测方法，探讨了刺激光颜色、强度、麻醉药物、束缚等因素对小鼠瞳孔对光反射的影响。同时结合视网膜电图（electroretinogram,ERG）观察了一种快速视网膜退行性变（retinal degeneration fast，rdf/B6）小鼠的PLR，以进一步探索视网膜功能客观评价方法。材料和方法1.成年雄性C57BL/6小鼠（SPF级，购自第四军医大学实验动物中心）40只用于预实验和实验研究。rdf/B6小鼠（SPF级）20只由第四军医大学航空航天医学系动物屏障实验室提供。2.采用远红外摄像镜头拍摄瞳孔，通过图像处理程序分析瞳孔图像动态变化的原理，建立了动物PLR检查系统，并用于观察不同颜色光及其强度刺激下小鼠PLR的动态变化以及麻醉、束缚的影响；采用12通道心电图记录仪（ECG6511, Inc, NihonKohden）记录束缚及麻醉状态下小鼠的心率；采用RETIport系统（Roland Consult，德国）记录ERG。3.采用SPSS13.0统计学软件对各实验数据进行统计分析。结果1.刺激光强度对正常C57BL/6小鼠PLR的影响在从2cd/m~2至256cd/m~2五个光亮度等级的白、红、绿及蓝色光刺激下，瞳孔收缩潜伏期（pupillary constriction latency,CL）无显著变化。瞳孔收缩幅度（constrictionamplitude，CA）与白、绿和蓝色的刺激光强度呈直线正相关（P<0.01），而与红色光强度无明显相关。瞳孔收缩速度（constriction velocity，CV）及瞳孔复张速度（re-dilationvelocity，RV）与白光、绿光及蓝光亮度等级呈直线负相关（P<0.01），与红色光强度无明显相关。2.刺激光颜色与正常C57BL/6小鼠PLR动态分析曲线参数的关系在弱光强（2cd/m~2）刺激时，红色光刺激时的CL较其他颜色光略有延长（P<0.05）其他三种光之间无明显差异；红色光刺激引起的CA明显小于白光（P<0.001），但是白光与绿色光与蓝色光刺激引起的CA变化之间无明显差异；CV、RV的变化与刺激光的颜色无关。在光强为8cd/m~2、32cd/m~2、128cd/m~2、256cd/m~2时，红色光刺激引起的PLR的CA明显小于白光（P<0.05），蓝色光刺激引起的CA值明显大于白光（P<0.05），绿色光刺激的CA与白光无明显差异（P>0.05）；红色光引起的CV稍大于白光（P<0.05），蓝色光引起的CV明显小于白光（P<0.05），绿色光与白色光刺激引起的CV无明显差异（P>0.05）；红色光引起的RV均大于白光（P<0.05），蓝色光引起的RV小于白光（P<0.05）,绿光与白光刺激引起的RV无明显差异（P>0.05）。3.束缚适应与麻醉药物对小鼠PLR的影响在束缚适应1d、2d和7d时，小鼠瞳孔直径自主调节幅度之间无显著差异，而在3d、4d和5d时，瞳孔直径自主调节幅度明显小于其他4天（P<0.05）。束缚适应5天后，束缚组小鼠瞳孔初始直径（initial pupil diameter，IPD）与塞拉嗪组小鼠之间无明显差异，但是大于氯胺酮麻醉组及氯胺酮联合塞拉嗪麻醉组（P<0.01）。氯胺酮组与氯胺酮联合塞拉嗪麻醉组二者之间的IPD无明显差异；束缚组小鼠的瞳孔收缩最小值（minimum pupil diameter。minPD）与氯胺酮麻醉组及氯胺酮联合塞拉嗪麻醉组相比均无明显差异。在强度为200cd/m~2，波长为625nm光刺激下，塞拉嗪麻醉组表现为PLR消失，瞳孔直径未见变化。束缚组PLR的CL值小于氯胺酮组及氯胺酮联合塞拉嗪麻醉组（P<0.05），CA值大于后两组（P<0.01），而后两组间无明显差异；束缚组CV值则小于氯胺酮麻醉组CV（P<0.01），氯胺酮麻醉组大于氯胺酮联合塞拉嗪麻醉组（P<0.01）；三组间的RV值无明显差异。在束缚适应的7d中小鼠心率无明显改变。麻醉后，氯胺酮组、塞拉嗪组与氯胺酮联合塞拉嗪麻醉组三者之间的心率无明显差异，但均小于束缚组（P<0.01），其中氯胺酮组部分小鼠出现心律不齐。4. C57BL/6小鼠、rdf/B6小鼠彩色光ERG比较在暗适应条件下，红色光刺激引起C57BL/6小鼠的暗适应视杆细胞反应和最大混合反应的b波幅值较白、绿和蓝光低（P<0.01），潜伏期稍有延长（P<0.01）；明适应后，红色光刺激未诱发出明显的视锥细胞反应及闪烁ERG（20Hz Flicker），蓝光刺激诱发ERG的波幅值均明显大于白光和绿光ERG的值（P<0.01），后两者之间无明显差异。不同强度颜色光刺激rdf/B6小鼠，未诱发出任何ERG波形。5. rdf/B6小鼠的PLR特点在rdf/B6小鼠，30cd/m~2光强度刺激下仅蓝光可以诱发出明显PLR，且CA小于野生型小鼠（C57BL/6）（P<0.01）；500cd/m~2光强度下蓝、绿、白光可以诱发PLR，其CA幅值分别是蓝>绿>白，其中蓝、绿光下的CA与野生型（C57BL/6）小鼠间无明显差异，白光诱发PLR的CA则小于野生型小鼠（P<0.05）；上述强度红光刺激rdf/B6小鼠未记录到明显的PLR。结论1.所建立动物PLR检查系统可以动态观察有色素小鼠PLR变化，PLR的相关参数与刺激光强度和光颜色有密切关系。2.适应性束缚可在一定程度保持C57BL/6小鼠PLR各参数值稳定，而麻醉药物（氯胺酮、塞拉嗪或联合应用）对相关参数有影响，提示在麻醉条件下研究PLR时应当注意排除这些影响。3.不同颜色光刺激下rdf/B6小鼠的PLR有明显区别，与野生型小鼠间也有显著的差异，提示ERG波形起源与PLR不完全相同，后者的起源更复杂。