何首乌的组织培养及秋水仙素处理的生理效应

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本文对何首乌组织培养技术进行优化研究,在此基础上使用秋水仙素处理培养体,研究秋水仙素处理对培养体生理生化指标的影响,为何首乌组织培养大量繁殖、种质资源保存以及多倍体诱导提供参考。主要结果如下:   1.不同灭菌时间对外植体(茎尖、茎段)的影响不同。对于茎段而言,用0.1%的氯化汞消毒7min的消毒效果较好,污染率为仅16%。对于茎尖而言,用0.1%的氯化汞消毒7min的消毒效果较好,污染率仅为12%。   2.不同浓度配比的6-BA、NAA对何首乌组培苗叶面积、植株高度、芽的增殖的影响差异不显著。其中,培养基MS+6-BA2 mg/L+NAA0.2 mg/L较有利于何首乌芽的增殖。   3.不同添加物(椰汁、苹果汁、香蕉泥、活性碳)对何首乌芽的增殖和生长产生不同的影响。在芽的增殖方面,椰子汁对芽的增殖有促进作用,增殖倍数达8.7,相反香蕉泥对芽的增殖有抑制作用;在生长指标方面活性碳表现出比较好的效果,较对照而言,叶片颜色较深,茎较粗,平均芽长较长。   4.不同外植体类型(带芽茎段、不带芽茎段、叶片)诱导愈伤组织的难易程度不同。带芽茎段相对比较容易诱导出愈伤组织,诱导率高达93.75%,不带芽茎段相对较难诱导出愈伤组织,诱导率为75%,叶片相对而言最不容易诱导出愈伤组织,诱导率仅为59.4%。   5.以茎段为外植体时,诱导愈伤组织的最佳培养基为:MS+2,4-D0.5 mg/L+6-BA0.1 mg/L+NAA3 mg/L;光照对于愈伤组织的生长有促进作用,相反活性碳却对何首乌愈伤组织的生长有抑制作用。   6.不同浓度的6-BA、NAA激素组合对愈伤组织芽分化的影响不同。分化率最高的培养基为:MS+6-BA1 mg/L+NAA0.1 mg/L,分化率为13.3%;在此培养基上再添加2,4-D0.05mg/L则对愈伤组织芽的分化有抑制作用,分化率仅为6.7%。但是,如果用脱落酸代替2,4-D,则芽分化被完全抑制。   7.不同浓度秋水仙素处理对何首乌叶片的叶绿素含量、过氧化氢酶(CAT)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化物歧化酶(POD)活性有不同影响。经过秋水仙素处理24h后,0.1%秋水仙素处理叶片的叶绿素含量明显低于对照,差异达极显著水平;0.3%秋水仙素处理叶片的叶绿素含量与对照接近,与0.1%处理之间叶绿素的含量差异达极显著水平。0.1%秋水仙素处理叶片的CAT酶活性明显低于对照,差异达极显著水平;但是0.1%和0.3%秋水仙素处理之间CAT酶活性差异不明显。0.1%和0.3%秋水仙素处理的叶片的POD酶活性明显低于对照,差异都达极显著水平;但是0.1%和0.3%秋水仙素处理之间POD酶活性差异不明显。0.1%和0.3%秋水仙素处理叶片的SOD酶活性与对照差异不明显,SOD酶活性有波动但总趋势是上升的。   8.同一浓度秋水仙素不同处理时间对何首乌的叶绿素含量、过氧化氢酶(CAT)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化物歧化酶(POD)活性有不同影响。经0.2%秋水仙素处理不同时间后,12h和24h处理之间的叶片叶绿素含量差异最显著,两者与对照差异均较显著,其他处理时间之间的叶绿素含量与对照差异不明显;各时间处理的叶片CAT酶活性均明显低于对照,与对照差异达极显著水平。其中12h处理与24h、36h、48h处理之间的CAT酶活性差异显著,24h、36h、48h处理的之间的CAT酶活性差异不明显。各时间处理叶片的POD酶活性与对照差异不明显,不同处理时间之间的POD酶活性差异也不明显;各时间处理的叶片的SOD酶活性与对照的差异不明显,不同处理时间之间的SOD酶活性差异也不明显。   9.移栽炼苗时先在珍珠岩过渡后移栽至黄心土的效果较好。何首乌在珍珠岩作为移栽基质时移栽成活率为33%;黄心土作为移栽基质时移栽成活率为50%;若先在珍珠岩过渡5天后再移栽至黄心土,移栽成活率则高达80%。
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