目的:1.用原核表达系统表达HSV-2型特异性抗原gG-2，用gG-2作为诊断抗原初步建立ELISAHSV-2型特异性检测诊断试剂盒；2.探讨原核表达的gG-2蛋白和pcDNAgG-2质粒在动物的免疫效果，为单纯疱疹病毒Ⅱ型核酸疫苗和蛋白亚单位疫苗提供研究资料;3用鼠-鼠细胞融合方法制备HSV-2型特异性单克隆抗体。 方法: 1.初步建立ELISAHSV-2型特异性检测诊断试剂盒。1.1获得目的基因、建立pET-30a-gG-2DNA质粒载体在GeneBank查得HSV-2gG-2基因序列，以HSV-2病毒之细胞培养物作为模板用PCR方法扩增目的基因，与pET-30a载体连接转化DH5α，用特异引物-PCR、酶切方法鉴定后挑选阳性菌落委托测序；1.2诱导表达、纯化目的蛋白将阳性菌落扩增、提取质粒转化L21菌株，用IPTG诱导、SDS-PAGE方法检追踪研究表达条件、用镍柱层析纯化目的蛋白(组胺酸标签)。用组胺酸抗体-Westernblot方法检测其抗原性；1.3ELISA试剂材料的研究将组装ELISA试剂盒的各种成分(抗原板、HRP-抗体、显色液等分别进行稳定性研究，以保证试剂盒稳定可靠；1.4试剂盒的特异性收集3份HSV-2感染过的标本和2份HSV-1感染过的标本，6份正常人标本，进行特异性检测。 2.pcDNAgG-2质粒和原核表达的gG-2蛋白免疫学初步探讨。2.1pcDNAgG-2质粒真核细胞的表达将pcDNAgG-2质粒在脂质体2000介导下转染Hep-2细胞，用免疫荧光方法追踪研究目的蛋白在真核细胞表达；2.2pcDNAgG-2质粒和原核表达的gG-2蛋白免疫学初步探讨将pcDNAgG-2质粒在DH5α量扩增，提取纯化后，接种途径为肌肉注射，接种量为4ug/只，每次1ug/只，共接种4次。末次接种7d后取血，用ELISA方法检测小鼠IgG抗体水平。将纯化的原核表达的gG-2蛋白接种小鼠，接种途径为腹腔注射注射，接种量每次为40ug/只，接种频率、次数和检测抗体方法同步。 3.HSV2型特异性单克隆抗体的制备将细胞培养之病毒甲醛灭活后接种于BALB/C小鼠，用其脾淋巴细胞与SP2/0细胞融合，用基因工程抗原(gG-2)包被酶标板用ELISA方法进行检测，筛选阳性克隆。经过克隆化获得单克隆杂交瘤，注射小鼠腹腔获得腹水，用ELISA方法检测腹水抗体效价。 结果: 1.初步建立了ELISAHSV-2型特异性检测诊断试剂盒。1.1构建pET-30a-gG-2质粒经PCR和酶切鉴定证实构建的pET-30a-gG-2质粒目的基因分子量与预测分子量一致，序列与GeneBank发表比较无误；1.2诱导表达、纯化目的蛋白将荷有pET-30a-gG-2的BL21菌株用不同条件诱导、经镍柱层析纯化了目的蛋白(组胺酸标签)，组胺酸抗体-Westernblot检测到目的抗原；1.3ELlSA试剂材料的研究将组装ELISA试剂盒的各种成分进行研究，结果表明本研究制备的抗原板存放时间长达6月无明显质量改变，HRP-抗体4℃存放10月活性无明显降低，显色液4℃存放时间6月显色效果无改变。装配成的试剂盒存放6月质量无明显改变；1.4试剂盒的特异性初步探讨收集的3份HSV-2感染过的标本全部阳性和2份HSV-1感染过的标本，6份正常人标本均阴性。 2.pcDNAgG-2质粒及gG-2基因工程蛋白免疫学初步探讨。2.1pcDNAgG-2DNA质粒真核细胞的表达用免疫荧光方法在转染pcDNAgG-2质粒的Hep-2细胞上测得融合蛋白表达； 2.2pcDNAgG-2和原核表达的gG-2蛋白免疫学初步探讨将pcDNAgG-2质粒接种昆明种小鼠，用ELISA方法测得特异IgG抗体，阳性率达60％。纯化gG-2蛋白接种昆明种鼠，用ELISA方法测得特异IgG抗体，阳性率达60％ 3.HSV-2型特异性单克隆抗体的制备经筛选，获得阳性克隆2株，分别为A9、E4。小鼠腹水抗体效价达1×10-5。 结论: 1.用原核表达系统克隆表达、纯化获得了目的蛋白gG-2，并作为抗原试剂，在研究出稳定ELISA基础试剂的基础上建立了ELISA试剂盒，结果表明用基因工程抗原为试剂制备的试剂盒特异、敏感、稳定、可靠。 2.用免疫荧光方法在pcDNAgG-2质粒体外转染真核细胞(Hep-2)上测到目的蛋白的表达，将pcDNAgG-2质粒肌肉途径接种小鼠，动物产生特异抗体。 3.获得2株分泌抗gG-2单克隆抗体的杂交瘤，核型待分析、抗体亚型待鉴定。