三七总皂苷调节哮喘小鼠气道炎症及Th亚群相关细胞因子的实验研究

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目的:本课题选取活血化瘀中药三七的主要成分提取物三七总皂苷(PNS)和三七民间常用剂型生三七粉对哮喘小鼠进行调节干预,通过观察小鼠肺组织病理变化及Th亚群相关的细胞因子IL-4、IFN-γ、IL-17表达的变化,初步探索三七防治哮喘的效果。探讨三七防治支气管哮喘的可能作用机制,为三七的临床应用提供新的思路和初步的研究基础。方法:SPF级BALB/c雌性小鼠80只,6~8周龄,体重(20±2)g,实验动物随机分成正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、生三七粉低、中、高剂量组(C、D、E、组),PNS低、中、高剂量组(F、G、H组),共计8组,每组10只。哮喘模型组与药物干预组于第1、8、15天腹腔注射0.2ml致敏液(含OVA50μg)致敏。第22天开始,2%OVA雾化液6m1雾化激发,每日一次,每次45分钟,连续雾化7天。正常对照组则用生理盐水替代OVA致敏和激发。药物干预组在雾化激发前30min灌胃给药。各组小鼠于末次激发24h后摘眼球取血及肺组织。肺组织制作石蜡切片,HE染色,观察肺组织病理学改变;血液离心后取血清用酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清中IL-4、IFN-γ、IL-17的浓度。结果:1.激发过程小鼠行为学变化:正常对照组(A组)小鼠激发后未见异常变化。哮喘模型组(B组)、药物干预组激发后可见哮喘样症状,以模型组较为明显,药物干预组有所减轻。2.肺组织病理观察结果:哮喘模型组肺内细支气管及血管周围,可见大量炎性细胞浸润,气道结构紊乱,气管腔内黏液渗出物明显增多,肺泡腔间隔扩大、增厚,周围组织水肿及炎性细胞浸润。正常组小鼠肺组织支气管及肺泡结构清晰,气道黏膜上皮完整,无明显的炎细胞侵润。药物干预组有不同程度的减轻。3.PNS对哮喘小鼠血清中细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17浓度的影响:PNS各剂量组对哮喘小鼠血清中细胞因子IFN-γ的表达具有升高的作用趋势,以低、中剂量效果明显,与哮喘模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.05、P<0.01)。PNS中剂量和PNS高剂量可以降低哮喘小鼠血清中IL-4的浓度与哮喘模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.01、P<0.01)。PNS低剂量组与哮喘模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。PNS中剂量组具有明显降低哮喘小鼠血清中IL-17的浓度的作用,与哮喘模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。其余剂量组与哮喘模型组比较,差异具无统计学意义(P>0.05)。4.生三七粉对哮喘小鼠血清中细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17浓度的影响:生三七粉中剂量可以升高哮喘小鼠血清中IFN-γ的浓度与哮喘模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。生三七粉高剂量和低剂量具有升高哮喘小鼠血清中IFN-γ浓度的作用趋势,但与模型组比较差异无统计学意义。生三七粉低、中、高剂量可以明显降低哮喘小鼠血清中IL-4的浓度,与哮喘模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.01、P<0.01、P<0.01)。生三七粉各剂量组均有降低哮喘小鼠血清中IL-17浓度的作用趋势。但与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1、实验初步证明PNS和生三七粉对哮喘小鼠肺组织细支气管及血管周围炎性细胞浸润有减轻作用,可减少气道上皮黏液分泌,改善气道炎症状态。2、PNS和生三七粉防治哮喘的机制之一可能是通过上调哮喘小鼠IFN-γ的分泌,抑制IL-4的分泌,进而促进Th0向Th1分化,抑制Th0向Th2分化,使Thl/Th2恢复失衡状态。3、PNS和生三七粉可能通过抑制哮喘小鼠IL-17的表达,减轻气道炎症反应,干预哮喘发作。
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