猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定及PCR检测方法的建立

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本研究从重庆某猪场病猪的肺脏、胸腔渗出液等材料中成功分离和鉴定了3株猪传染性胸膜肺炎放线杆菌。试验结果表明,分离株猪传染性胸膜肺炎放线杆菌为革兰氏阴性,呈短杆菌和球杆菌等多种形态;该菌在普通营养琼脂、麦康凯琼脂培养基上不能生长;在兔血琼脂培养基上培养,形成β溶血的细小菌落;在兔血巧克力琼脂培养基上培养,可形成透明的1-2mm大小的菌落;在胰胨大豆胨(TSA)培养基上培养,能形成乳白色菌落;在加V因子的普通营养琼脂培养基上培养,菌落呈乳白色;分离株细菌培养需要加入V因子,尿素酶阳性,MR、VP和吲哚试验呈阴性。动物试验表明分离株具有致病性,能引起猪发生典型的胸膜肺炎症状。 试验以自制的APP标准阳性血清,对分离的细菌进行琼脂扩散试验分型检测,结果表明猪胸膜肺炎放线杆菌分离株MC为血清3型;ME为血清7型;MH为血清型9型。 本研究针对猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的ds bE-like基因设计了1对特异性的引物,成功建立了PCR检测APP的新方法。该方法特异性强、敏感性高和重复性好,对APP菌液最低检出浓度为71CFU/ml。
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