论文部分内容阅读
环节动物S型凝集素在结构和生化性质上都有别于一般的S型凝集素。根据其性质,本研究采用惰性分子筛填料Sepharose CL-6B作为亲和层析介质对蚯蚓S型凝集素进行了纯化。以EDTA-MEPBS(2 mmol/L EDTA,4 mmol/Lβ—巯基乙醇,150 mmol/L NaCl,20 mmol/L磷酸盐pH7.2)作为平衡液和氨水(150mmol/L,pH10.5)作为洗脱液得到的蛋白质经SDS—PAGE、凝血实验及荧光检测等证明了其为蚯蚓S型凝集素。本法一个步骤即可从蚯蚓提取液分离到电泳纯的S型凝集素,比起传统方法来更加快捷高效,优越性明显。此方法的应用将有利于对环节动物S型凝集素的深入研究。本研究利用Q Sepharose XL阴离子交换层析法从猪心分离肌红蛋白和细胞色素C。通过实验,发现在pH7.6-8.5的范围内,细胞色素C可以牢固地结合于Q Sepharose XL阴离子交换柱上,肌红蛋白结合强度较低,而大多数的杂蛋白则基本没有结合。因此,在pH7.9条件下上样,pH7.2洗脱就可以将三者分离。通过SDS-PAGE及蛋白相对含量分析表明,通过这一步,肌红蛋白和细胞色素C的纯度分别为89.7%和93.2%。将所得的两样品,再分别进行Sephadex G-75凝胶层析,得到了电泳纯的肌红蛋白和细胞色素C。最终,得到的肌红蛋白和细胞色素C的产量分别为77.43 mg/kg.和84.56 mg/kg。此实验表明,可以通过QSepharose XL阴离子交换层析从猪心快速分离肌红蛋白和细胞色素C。利用亲和层析法研究人血红蛋白、蚯蚓的血红蛋白、马肌红蛋白和马心细胞色素C彼此间的亲和作用。结果表明蚯蚓血红蛋白、人血红蛋白与其他几种含血红素蛋白质间均存在亲和力,并发现这种亲和力的大小与它们间相似性有一定的关系。