槟榔中槟榔碱的提取分离及其活性研究

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为了研究槟榔中槟榔碱及其生理活性,本研究拟采用乙醇回流提取法、超声波提取法、超临界CO2萃取法等三种提取方法提取槟榔中的槟榔碱,结合高效液相色谱法对槟榔碱进行定性定量,并初步探讨了槟榔碱的抑菌和抗氧化两方面的生理活性。具体工作如下:1.槟榔中槟榔碱检测方法的建立建立了高效液相色谱法测定槟榔中槟榔碱含量的方法。HPLC测定槟榔中槟榔碱含量的适宜条件为:Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150mm,5μm)色谱柱;流动相为甲醇:0,1%体积分数的磷酸--9:1(v/v);流速1.0 mL/min;检测波长215nm;柱温30℃:进样量5 u L。采用外标面积归一法测得样品含量。经验证,该方法有较高的精密度、准确度及可靠性。2.槟榔中槟榔碱的乙醇回流提取工艺研究以海南槟榔鲜果为研究对象,采用加热回流提取法从槟榔中提取槟榔碱。以槟榔碱得率为考察指标,用高效液相色谱法测定其含量,在单因素试验的基础上,采用L9(34)正交试验得出槟榔中槟榔碱的最佳提取工艺:乙醇体积分数85%,料液比1:14(g/mL),提取温度85℃,碱化pH8。槟榔碱得率为(0.251±0.03)%(n=3)。3.槟榔中槟榔碱的超声波提取工艺研究以海南槟榔鲜果为研究对象,采用超声波法提取法提取了槟榔果中的槟榔碱。探讨从槟榔中提取槟榔碱的提取率及超声波提取法的最佳工艺。以槟榔碱得率为考察指标,用高效液相色谱法测定其含量,在单因素实验的基础上,采用L9(34)正交试验得出槟榔中槟榔碱的最佳提取工艺为:乙醇体积分数85%,料液比为1:8,提取温度65℃,碱化pH值为8。槟榔碱得率为(0.199±0.05)%(n=3)。4.响应面法优化超临界CO2萃取槟榔碱工艺以海南槟榔鲜果为研究对象,采用微波预处理+超临界CO2流体萃取槟榔中的槟榔碱,以槟榔碱得率为考察指标,用高效液相色谱法测定其含量。通过单因素试验对影响槟榔碱得率的6个影响因素(萃取时间、携带剂用量、CO2流量、萃取温度、萃取压力和微波功率)进行考察,并对3个主要影响因素(萃取压力、萃取温度和微波功率)利用响应面法(RSM)分析,模拟得到二次多项式回归方程的预测模型。结果表明:微波预处理能明显提高槟榔碱得率,最佳工艺条件为:萃取压力33MPa、萃取温度63℃、微波功率480W,在此条件下槟榔碱得率为(0.448±0.007)%(n=3),与理论值0.452%相差不显著。5.槟榔中槟榔碱体外抑菌活性研究以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、炭疽芽孢杆菌、黑曲霉、青霉等8种菌作为供试菌,通过抗菌实验探讨槟榔碱的体外抗菌作用。实验结果表明,三种方法提取的槟榔碱对变形杆菌、白色念珠菌、炭疽芽孢杆菌有很好的抑制作用,超声波提取物的最低抑菌浓度(MIC)为2.6mg/mL、乙醇回流提取物的最低抑菌浓度(MIC)为1.4mg/mL、超临界CO2萃取物的最低抑菌浓度(MIC)为0.8mg/mL,对黑曲霉、青霉没有抑制作用。三种方法提取的槟榔碱抑菌活性大小:超临界CO2萃取法>乙醇回流提取法>超声波提取法。创新点:首次采用响应面法优化得到槟榔中槟榔碱提取得率相对较高的提取工艺,并首次探讨了槟榔碱的体外抑菌活性,且其活性大小与槟榔碱含量正相关。
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