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目的:探讨瘦素长程干预对大鼠新生期反复长程惊厥脑损伤的干预作用和分子机制。方法:日龄6天(P6)的Sprague-Dawley(SD)大鼠40只,随机(随机数字表法)分成四组,每组10只,即:空白对照组(Control组)、单纯瘦素组(Leptin组)、单纯惊厥组(RS组)和惊厥加瘦素组(RS+Leptin组)。RS组和RS+Leptin组大鼠使用三氟乙醚反复诱导惊厥发作,使惊厥持续30min,每日一次,连续7天(P6-P12),建立新生期大鼠三氟乙醚惊厥模型。于P13时,Leptin组和RS+Leptin组开始瘦素腹腔注射(2mg/kg),连续10天。于P23和P30进行神经行为学测试(负向趋地反射、前肢悬吊反射、悬崖回避反射、平面反正反射及旷场实验);P27-P33进行Morris水迷宫逃避潜伏期和探索实验;定时检测大鼠体重变化。P34时,分离大脑皮层及海马,采用免疫印记(Western blot)技术检测:锌离子通道蛋白:ZnT1、ZIP7;质膜损伤标记蛋白:cPLA2;自噬信号通路相关蛋白:Beclin-1、Bcl-2、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Cathepsin E;记忆分子:CaMKⅡα和CaMKⅡβ的表达情况。采用Neo-Timm’s法检测海马苔藓纤维发芽情况。结果:1、体重变化:四组大鼠的体重总体差异有统计学意义[F(27,360)=3.099,P<0.05],进一步比较发现:P12-P33期间各时间点,RS组与RS+Leptin组体重均较Control组大鼠明显下降(P<0.05),Leptin组与Control组体重差异无统计学意义。2、神经行为学评分:(1)负向趋地反射:P23和P30时,四组评分差异均有统计学意义[FP23(3,16)=168.1,P<0.05;FP30(3,16)=24.84,P<0.05],进一步两两比较发现:RS组均较Control组时间明显延长(P<0.05),RS+Leptin组与RS组相比均明显缩短(P<0.05),趋于正常;(2)前肢悬吊反射:P23和P30时,四组评分差异均有统计学意义[FP23(3,16)=37.15,P<0.05;FP30(3,16)=4.68,P<0.05],进一步两两比较发现:RS组较Control组时间均明显缩短(P<0.05),P23时,RS+Leptin组较RS组时间均明显延长(p<0.05),趋于正常;(3)悬崖回避反射:p23和p30时,四组评分差异有统计学意义[fp23(3,16)=136.2,p<0.05;fp30(3,16)=12.47,p<0.05],进一步两两比较发现:rs组较control组时间均明显延长(p<0.05),rs+leptin组较rs组时间均明显缩短(p<0.05),与control组相比差异无统计学意义,趋于正常;(4)平面反正反射:p23和p30时,四组评分差异均有统计学意义[fp23(3,16)=12.63,p<0.05;fp30(3,16)=16.04,p<0.05],进一步两两比较发现:rs组较control组时间明显延长(p<0.05),rs+leptin组较rs组时间均明显缩短(p<0.05),与control组相比差异无统计学意义,趋于正常。3、旷场实验:(1)延迟时间:p23和p30时,四组评分差异均有统计学意义[fp23(3,16)=15.50,p<0.05;fp30(3,16)=15.50,p<0.05],进一步两两比较发现:rs组较control组时间明显延长(p<0.05),rs+leptin组较rs组时间明显缩短(p<0.05),与control组相比差异无统计学意义,趋于正常;(2)开场得分:p23和p30时四组得分差异均有统计学意义[fp23(3,16)=182.10,p<0.05;fp30(3,16)=8.80,p<0.05],进一步两两比较发现:rs组较control组得分明显降低(p<0.05),rs+leptin组较rs组得分明显增加(p<0.05),趋于正常。4、morris水迷宫:(1)定位航行:two-wayanova分析显示:四组逃避潜伏期总体差异具有统计学意义[f(12,48)=17.52,p<0.05];进一步两两比较发现:试验第2-4天时,rs组较control组逃避潜伏期明显延长(p<0.05),rs+leptin组较rs组潜伏期明显缩短(p<0.05),与control组相比差异无统计学意义,趋于正常;(2)空间探索试验:四组穿平台次数差异具有统计学意义[f(3,16)=17.71,p<0.05],进一步两两比较发现:rs组与control组相比穿平台次数明显减少(p<0.05),rs+leptin组与rs组相比穿平台次数明显增加(p<0.05),与control组相比差异无统计学意义,趋于正常。5、neo-timm’s染色:四组海马ca3区和齿状回苔藓纤维发芽半定量评分差异均具有统计学意义[fca3(3,16)=21.69,p<0.05;f齿状回(3,16)=84.51,p<0.05],进一步两两比较发现:rs组较control组发芽明显增加(p<0.05),rs+leptin组较rs组发芽明显减少(p<0.05),与control组相比差异无统计学意义,趋于正常。6、westernbolt结果:(1)锌离子通道蛋白:四组大鼠大脑皮层和海马锌离子通道蛋白表达差异均具有统计学意义[znt1:f皮层(3,16)=24.78,p<0.05;f海马(3,16)=84.38,P<0.05;ZIP7:F皮层(3,16)=21.17,P<0.05;F海马(3,16)=14.48,P<0.05],进一步两两比较发现:RS组较Control组表达均明显增加(P<0.05),RS+Leptin组较RS组表达明显减少(P<0.05),与Control组相比差异无统计学意义,趋于正常;(2)质膜损伤标记蛋白cPLA2:四组大鼠大脑皮层和海马表达差异均具有统计学意义[F皮层(3,16)=62.23,P<0.05;F海马(3,16)=35.71,P<0.05],进一步两两比较发现:RS组较Control组表达均明显增加(P<0.05),RS+Leptin组较RS组表达明显减少(P<0.05),与Control组相比差异无统计学意义,趋于正常;(3)自噬信号通路相关蛋白:四组大鼠大脑皮层和海马自噬信号通路相关蛋白表达差异均具有统计学意义[Beclin-1/Bcl-2:F皮层(3,16)=22.26,P<0.05,F海马(3,16)=7.202,P<0.05;LC3Ⅱ/LC3Ⅰ:F皮层(3,16)=16.37,P<0.05,F海马(3,16)=10.37,P<0.05;Cathepsin E:F皮层(3,16)=34.08,P<0.05,F海马(3,16)=186.5,P<0.05],进一步两两比较发现:RS组较Control组均明显升高(P<0.05),RS+Leptin组较RS组明显降低(P<0.05),趋于正常;(4)记忆分子:CaMKⅡα:四组大鼠大脑皮层和海马表达差异均具有统计学意义[F皮层(3,16)=284.7,P<0.05;F海马(3,16)=144.0,P<0.05],RS组较Control组均明显降低(P<0.05),进一步两两比较发现:RS+Leptin组较RS组明显升高(P<0.05),趋于正常;CaMKⅡβ:四组大鼠大脑皮层和海马表达差异无统计学意义[F皮层(3,16)=0.7919,P>0.05;F海马(3,16)=0.8002,P>0.05]。结论:1.瘦素长程干预能显著减轻新生期反复长程惊厥所致神经行为、认知损伤及海马苔藓纤维异常发芽;2.新生期反复长程惊厥能显著上调远期皮层和海马锌离子转运蛋白、质膜损伤标记蛋白和自噬通路相关蛋白,下调记忆相关分子表达;瘦素能使上述通路恢复正常;3.本研究表明瘦素可能通过Zn Ts/cPLA2/Atg通路调节记忆分子CaMKⅡα表达,从而实现对新生期惊厥性脑损伤的保护作用。